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磷酸化位点的图怎么看
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磷酸化位点的图怎么看
磷酸化位点的图怎么看是蛋白zhìzǔxué研究中的关键分析环节,主要用于解析dànbáizhì翻译后修饰(PTM)的动态变化及其功能影响。这类图谱通常基于质谱(MS)数据生成,通过可视化工具呈现磷酸肽的序列、修饰位点定位概率以及定量变化。在阅读磷酸化位点的图时,需重点关注以下几个核心要素:首先,序列覆盖度图展示磷酸肽在dànbáizhì序列中的分布,修饰位点通常以特殊符号(如红色星号)标注;其次,谱图质量评分(如Ascore或PTM-score)反映位点定位的可靠性,分值越高表明修饰位点鉴定越准确;zuì后,定量热图或火山图可直观比较不同样本间磷酸化水平的差异,显著变化的位点需结合统计学阈值(如p-value < 0.05)和倍数变化(如FC > 2)进行判断。此外,磷酸化位点的图怎么看还需结合上下文功能注释,例如激酶-底物网络预测(通过工具如PhosphoSitePlus或NetworKIN)或功能富集分析(如KEGG通路),以揭示修饰的生物学意义。
磷酸化位点的图怎么看的核心技术依赖高分辨率质谱平台(如Orbitrap或TOF)和生物信息学流程。实验阶段需通过磷酸化富集(如TiO2或IMAC)提高修饰肽段的检测灵敏度;数据分析环节则需借助软件(如MaxQuant、PhosphoRS)实现位点定位和定量。具体费用需要根据实验需求和样品情况来确定。值得注意的是,磷酸化位点的图怎么看需警惕假阳性问题,可通过反向数据库搜索或合成肽段验证降低误差。
磷酸化位点的图怎么看的数据解读还需考虑修饰的动态性。例如,同一dànbáizhì的不同磷酸化位点可能呈现相反的调控趋势(如激活型与抑制型修饰共存),此时需结合功能实验(如点突变或激酶抑制)验证特定位点的作用。此外,时间序列数据的磷酸化位点的图怎么看可揭示信号通路的时序激活模式,这对研究细胞响应外界刺激的分子机制尤为重要。
常见问题:
Q1. 如何判断磷酸化位点的图中位点定位的可靠性?
A:可靠性主要依赖三个指标:一是谱图匹配得分(如Andromeda Score),需高于设定阈值(通常>40);二是修饰位点定位概率(如PTM-score ≥ 20);三是存在多个特征性磷酸化碎片离子(如中性丢失峰或immonium ion)。建议通过手动验证关键谱图进一步提升可信度。
Q2. 磷酸化位点的图中低丰度修饰位点为何难以检测?
A:低丰度修饰的检测受限因素包括:1)非修饰肽段的信号压制,需优化富集方案(如增加TiO2与肽段的比例);2)离子化效率差异,可通过衍生化(如TMT标记)提升灵敏度;3)质谱动态范围不足,建议采用DDA与DIA混合采集模式。
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文献和实验phosphorylation)和单体法(Building block approach),如Figure 2所示。前者是在多肽序列合成结束后再在固相载体上对丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸的侧链羟基进行磷酸化,可以在同一次合成中同时得到带有和不带有磷酸化位点的多肽;而后者则将适当保护的磷酸化氨基酸直接引入到多肽序列中,操作较前者更为简单,现已成为磷酸化多肽合成的首选策略。 在采用单体法构建磷酸化多肽时,目前广泛采用的原料为侧链单苄基保护的氨基酸:Fmoc-AA(PO(OBzl)OH)-OH (AA = Ser, Thr
xiujing_001 各位高手:我正在做信号通路,请问如何知道一个蛋白的磷酸化位点,比如PERK(protein kinase R-like endoplasmic reticulum kinase)?多谢了! biolinkphilic 一般蛋白的磷酸化位点就是位于苏氨酸、丝氨酸和酪氨酸上 xiujing_001 有查找磷酸化位点的工具吗?比如软件之类的 本文
yysghyy 请问各位高手,1)除了质谱分析还有什么办法可以确定某个蛋白的磷酸化位点; 2)还有如果知道了这个磷酸化位点怎样可以抑制其磷酸化(研究其下游信号通路)? 3)我研究的某个受体具有酪氨酸激酶区域,也知道了几个磷酸化位点,但是研究发现其酪氨酸激酶活性并不高,这是什么意思?是说其磷酸化位点不易被磷酸化,还是可以磷酸化,但激活了另外的信号通路? 非常感谢! narcissus27 回答
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