- ￥150
- 经科
- JK-533
- 国产
- 2025年12月05日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
现货
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海经科化学科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
100ml
产品简介
RIPA裂解液是一种经典的细胞组织快速裂解液，对动物细胞膜、胞浆、胞核成分均有较强的裂解作用，裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。RIPA裂解液的配方有很多种，根据其裂解液的强度大致可以分为强、中、弱三类。
RIPA裂解液（中）的主要成分为50 mM Tris-Hcl（pH7.4），150mM NaCl，1% NP-40，0.5% sodium deoxycholate，0.1% SDS以及Sodium Orthovanadate，Sodium Fluoride，EDTA等。本产品需要和常规的蛋白酶抑制剂一起使用，以达到更好的提取效果；本产品含有磷酸酶抑制剂，可用于提取磷酸化蛋白。
用RIPA裂解液（中）裂解得到的蛋白样品，可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
使用说明
1、使裂解液充分融解，混匀，取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM，根据具体实验需求可选择加入蛋白酶抑制剂。
2、根据样品的类型进行如下操作：
对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍（若血清中的蛋白没有干扰，可不洗）。按照6孔板每孔加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液。用移液器吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。
对于悬浮细胞：离心收集细胞，去除培养基，用手指把细胞用力弹散，按照6孔板每孔细胞加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应无明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管后再裂解。大团的细胞较难裂解充分，而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触，相对比较容易裂解充分。
对于组织样品：把组织剪切成细小的碎片。按照每20mg组织加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液。（如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。）使用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
3、样品充分裂解后，4℃ 10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western blot、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加150ul裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200或250ul。
注意：RIPA裂解液（中）的裂解产物中经常会出现透明胶状物，其主要成分为基因组DNA，当检测的目标蛋白不与基因组DNA紧密结合，可以直接离心裂解产物，取上清液用于后续实验；如果目的蛋白与基因组DNA结合非常紧密，可通过超声处理打碎打散透明胶纸物，随后离心取上清用于后续实验。
保存条件
-20℃保存，一年有效。加入蛋白酶抑制剂后建议适量分装 -20℃冻存，避免反复冻融。
注意事项
1、为取得最佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。
2、需自备PMSF。
3、裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
4、可能需要通过一些预实验来摸索最佳的适合您实验条件的裂解液。
5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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文献和实验棕色小玻璃瓶，标准包装10mg,20mg,50mg,100mg,或根据客户要求提供相应包装
1ml RIPA buffer contains 35μl proteinase inhibitor(sigma cat no P8340) and 10μl phosphatase inhibitorRIPA buffer 最终浓度1M Tris-HCl pH7.5) 5 ml 50mMNaCl 0.87g 0.15 MNa-deoxycholale 0.1g （1%）0.5M EDTA(pH8.0) 0.8mlNaF 41 mgNonidet P40 1 ml （1%）Aprotinin
师赠王老吉 在提取血中DNA时，细胞裂解液是指？平常的细胞裂解液，还是白细胞或者红细胞的裂解液？ liushan8_9 白细胞或者红细胞的细胞膜应该是一样的吧。 yyf87255300 在提取外周血DNA时，成熟的红细胞内没有核，所以裂解的外周血的白细胞，我们实验室用的裂解液是三蒸水 zjubell 师赠王老吉 wrote:
细胞沉淀后，加入预冷的 RIPA 液（含PMSF），RIPA 液的用量：按照 0.5 mL 每 5×106 细胞计算。轻轻混匀细胞悬液，用振荡器在 4℃ 振荡 15min 以裂解细胞。 用经蒸馏水预冷的橡皮或塑料细胞刮棒将贴壁细胞转移至一离心管中。 于 4℃，10000 rpm 离心裂解液 15 min，迅速转移上清至另一离心管中，弃掉沉淀。 将 Agarose protein A+G 珠子混匀：用预冷的 PBS 洗涤 Agarose protein A+G 珠子两次，并将其用 PBS 调
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