DiD (细胞膜远红外荧光探针)

产品简介

DiD，DiO，DiI和DiR染料是一族亲脂性的荧光染料，可以用来染细胞膜和其它脂溶性生物结构。当与细胞膜结合后其荧光强度大大增强，这类染料有着很高的淬灭常数和激发态寿命。一旦对细胞染色，这类染料在整个细胞膜上扩散，最佳浓度时可以使整个细胞膜染色。它们的荧光颜色区分明显：DiI（红色荧光），DiO（绿色荧光），DiD（远红外荧光）和 DiR （深红色荧光），这使得他们可以用来对活细胞进行多色成像和流式分析。

DiD是DiI的类似物，但具有更长的激发和发射波长，为远红外荧光，在一些细胞和组织染色中更有优势，特别适合用于进行多种荧光的同时染色。DiD可被633nm的氦-氖激光所激发，DiD在进入细胞膜之前荧光非常弱，仅当进入到细胞膜后才可以被激发出很强的荧光。DiD被激发后可以发出远红外的荧光，最大激发波长为644nm，最大发射波长为663nm。

DiD被广泛用于正向或逆向的，活的或固定的神经等细胞或组织的示踪剂或长期示踪剂。还用于检测细胞的融合和粘附，检测发育或移植过程中细胞迁移，通过FRAP检测脂在细胞膜上的扩散，检测细胞毒性和标记脂蛋白等。

DiD染色后可以兼容免疫荧光实验。建议使用免疫染色通透液(Saponin)或使用洋地黄皂苷配制的不会溶解细胞膜的通透液进行通透，其它去垢剂配制的通透液可能会溶解细胞膜上的脂类物质，造成DiD失去结合位置，最终导致DiD的染色失效。但通透也可能会影响DiD在细胞膜上的定位并会增加细胞内的染色，具体实验中需根据实验的需求选择合适的细胞通透液。

产品信息

英文名：DiIC18(5); 1,1'-Dioctadecyl-3,3,3',3'-Tetramethylindodicarbocyanine Perchlorate

分子式：C61H99ClN2O4

分子量：959.91

纯度：≥95%

 

使用方法（仅供参考）

一、DiD细胞膜染色液制备

1．配置DMSO或EtOH 储存液：用DMSO或EtOH配置浓度1-5 mM的储存液。

2．工作液制备：用合适的缓冲液（如无血清培养基，HBSS或PBS）稀释储存液，配制浓度为1-5 µM的工作液。

注：工作液的最终浓度是根据不同细胞和实验的经验来配制，可以从推荐浓度的十倍以上寻找最佳条件。  

二、细胞染色

a.对于悬浮细胞

1．悬浮细胞密度为1×106/mL加入到工作液中。

2．在37℃培养细胞5～20分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。

3．1000-1500rpm离心5分钟。

4．去除上清，再次缓慢加入37℃预温的培养液。

5．重复步骤3和4，两次以上。

b.对于贴壁细胞

1．吸去多余的培养液。

2．加入染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。

3．在37 ℃培养细胞 5～20分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。

4．吸去染料工作液，用培养液清洗2～3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，培养5～10分钟，然后吸干培养基。

三、结果分析

显微镜下观察或流式细胞仪检测

保存条件

-20℃干燥避光保存，有效期一年。

注意事项

1、荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2、Di系列染料是脂溶性染料，在缓冲溶液中容易析出，建议加入表面活性剂（例如F127或者吐温20），终浓度千分之一。

3、本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。

4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。