OKT3小鼠杂交瘤（抗CD3）细胞

OKT3小鼠杂交瘤（抗CD3）细胞

产品编号：CL-233m

一、细胞简介

OKT3细胞是一株用人外周血淋巴细胞免疫小鼠，然后取免疫小鼠的脾细胞与P3X63Ag8.U1骨髓瘤细胞融合而建株的细胞系。

二、细胞特性

来源：小鼠脾脏，杂交瘤细胞

形态：淋巴母细胞，半贴壁半悬浮生长

含量：>1x10⁶cells

运输：T25瓶x1（常温运输）/含有1mL细胞悬液的冻存管x2（干冰运输）

用途：本产品仅供实验室研究使用，不可用于动物或人类治疗或诊断用途

三、完全培养基及冻存液配制

1) 该细胞完全培养基为：IMDM+20%FBS+1%P/S

2) 培养环境：37℃；95%Air，5%CO₂

3) 冻存液：推荐使用非程序无血清细胞冻存液（货号：RC-0102）

四、收货注意事项

1) 收到细胞后，请检查发货培养瓶的状况，若发现培养瓶破损、有液体溢出及细胞有污染，冻存细胞若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落，请拍照后及时与我们联系。

2) 75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，在显微镜下确认细胞生长状态时，最好在低倍镜（4或5×物镜）下进行，能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10×和20×物镜下，同时给刚收到的细胞拍照，（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为细胞需要售后时提供收到细胞时细胞状态的依据。

3) 对于半贴壁半悬浮生长的细胞：静置后显微镜下观察细胞生长情况，若细胞密度未超过80%，收集悬浮细胞，加入5mL完全培养基到原瓶中，放入细胞培养箱中继续培养；若细胞密度超过80%，可进行传代处理，传代时需要收集培养基中悬浮的细胞。首次传代，建议1:2传代（两个T25瓶）。

 

细胞培养操作说明

一、细胞复苏

1. 将含有1mL细胞悬液的冻存管快速放入37℃水浴中，摇晃冻存管加速解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%酒精擦拭冻存管外壁。

2. 将冻存管内容物加入到含有5mL完全培养基的离心管中混合均匀，1000rpm离心5min。

3. 弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀，接种于T25培养瓶中，放入培养箱中培养过夜。

4. 第二天换液并检查细胞密度。

注意：在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和佩戴防护面罩，避免冻存管爆炸造成人员伤害。

二、细胞传代：细胞密度达80%～90%，即可进行传代

1. 悬浮细胞用离心管收集细胞悬液，1000rpm离心5min，弃去上清液；

2. 贴壁细胞用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次；

3. 加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53mMEDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后，加5mL以上含10%血清的完全培养基终止消化；

4. 轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出至离心管中，1000rpm离心5-8min，弃去上清液；

5. 将悬浮细胞和贴壁细胞收集到的细胞沉淀，加1-2mL完全培养基吹打混匀；

6. 按5-6mL/瓶补加完全培养基，将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含5-6mL完全培养基的培养皿中或者培养瓶中，放入培养箱中培养。

三、细胞冻存

收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。步骤如下：

1. 细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10⁶~1×10⁷个活细胞/mL。

2. 1000rpm离心3-5min，去掉上清，用细胞冻存液重悬细胞，按每1mL冻存液含1×10⁶~1×10⁷个活细胞/mL分配到一个冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

3. 将要冻存的细胞放入-80℃冰箱中，24h后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。

注意事项：

所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全柜内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。