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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名:
M. dunni clone III8C,M.dunni(Clone III8C),Clone IIIC8
- 库存:
999
- 供应商:
武汉赛奥斯生物科技有限公司
- 肿瘤类型:
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- 细胞类型:
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- 品系:
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- 组织来源:
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- 相关疾病:
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- 物种来源:
小鼠
- 免疫类型:
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- 细胞形态:
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- 是否是肿瘤细胞:
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- 器官来源:
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- 运输方式:
常温/干冰
- 年限:
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- 生长状态:
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- 规格:
1×10⁶cells
M.dunni(CloneIII8C) 小鼠皮肤成纤维细胞
产品编号:CL-146m
细胞特性
形态:成纤维细胞样,贴壁生长
含量:>1x10⁶cells
规格:T25瓶(常温运输)/ 1mL冻存管包装(干冰运输)
用途:仅供科研使用
培养基及培养冻存条件准备
完全培养基 |
90%McCoy's 5a + 10%FBS |
培养条件 |
37℃;5%二氧化碳 + 95%空气 |
冻存液 |
90%FBS + 10%DMSO |
收货须知
收货当天发现异常,请在 24 小时内及时联系客服,逾期视为收货良好;冻存管形式,收货后及时置于-80℃冰箱保存,若长时间不使用,应过夜转移至液氮保藏;T25 形式,收货后先培养瓶原装置于培养箱静养 4h,然后再对细胞进行常规操作。复苏时每管一次用完不得留存,复苏后传一代,即可正常使用。请严格按照本说明操作,否则造成细胞失活等情形,不予提供补发服务 。
细胞复苏、传代、冻存操作
(一)冻存细胞的复苏
① 新制 100mm 平皿 1 个,含 12mL 上述培养液;
② 冻存管从液氮或-80℃中取出,37℃水浴 1~2min,待完全溶解后尽快移入安全柜复苏;
③ 用无菌吸管吸取溶解液打入新制平皿中,顺时针摇匀;
④ 放入(37℃,5%CO2)培养箱中,过夜换液,2-4 天长满。
(二)细胞传代/冻存
将旧培养液吸除,PBS 清洗两遍后,加入 2mL(/100mm 皿/T25 瓶)胰酶(0.25%Trypsin+0.02%EDTA),在显微镜下观察,期间禁止摇晃培养皿,细胞刚有脱落时,吸除大部分胰酶,留约 0.5mL,移至培养箱消化,约 0.5min 取出。传代用 6mL CM5-1 培养液终止消化,轻轻吹打均匀细胞,后可分 3~6 皿培养;冻存则用 3mL 冻存液(90%FBS+10%DMSO)终止消化,吹打均匀,分为 3 支冻存管,用程序降温盒于-80℃冻存。
注意事项:
① 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
② 建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意:冻存管浸没在液氮中会泄漏,并会慢慢充满液氮。解冻时,液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子,从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。
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文献和实验Single Clone Excision Protocol
500ml 20% maltose and 500ml 1 M MgSO4 to 50 ml LB broth). Next day: 3.If you're making new cells,spin them down 5 min at 1500 x g in the C0650 rotor in the Beckman centrifuge,then resuspend in about 40 ml 10 mM MgSO4,and quantify absorbance
Clone Genes From a Phage Library
for phage. 2.9g NaCl(50 mM), 1g Mg SO4 (10 mM), 25 ml Tris pH 7.5 (50 mM), 50 mg gelatin (100 g/l) in 500 ml-- autoclave. • NaOH for plaque lifts: 0.5M NaOH, 1.5M Na Cl, 1 mM EDTA. • Tris for plaque lifts: 0.5M Tris HCl pH 8, 1.5 M
Polymerase III in vitro Transcription
: 4.0 μl 5X Pol III transcription buffer 0.2 μl 0.1 M DTT 0.2 μl alpha amanatin (1 mg/ml) 0.2 μl RNAse Inhibitor H2O to a final volume of 16 microliters less the maximum volume of protein to be added. Aliquot the second mix to all reaction tubes
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