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蛋白质谱有哪些图谱
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dànbáizhì谱有哪些图谱
dànbáizhì谱技术作为现代蛋白zhìzǔxué研究的重要工具,通过质谱仪对dànbáizhì或多肽进行质量分析和结构解析,能够生成多种类型的图谱,为dànbáizhì鉴定、定量、翻译后修饰分析等提供关键数据。dànbáizhì谱有哪些图谱主要包括一级质谱图(MS1)、二级质谱图(MS2/MS/MS)、总离子流图(TIC)、提取离子流图(EIC)、以及质量精度图等。这些图谱在蛋白zhìzǔxué研究中各具功能,共同构成完整的分析体系。
一级质谱图(MS1)是dànbáizhì谱有哪些图谱中zuì基础的呈现形式,直接反映样品中肽段或dànbáizhì的质荷比(m/z)和信号强度。通过高分辨率质谱仪(如Orbitrap或TOF)获取的MS1数据能够jīngquè测定肽段的质量,为后续的定量分析(如Label-free或SILAC)提供依据。二级质谱图(MS2/MSMS)则通过对特定前体离子进行碎裂(如CID、HCD或ETD),生成碎片离子谱,用于肽段序列鉴定。这种图谱是dànbáizhì鉴定的核心数据,尤其适用于数据库搜索算法(如MaxQuant或Sequest)。总离子流图(TIC)记录了整个色谱分离过程中所有离子的总信号强度,常用于评估液相色谱(LC)分离效果和样品复杂度。提取离子流图(EIC)则针对特定m/z值的离子信号进行提取,用于目标dànbáizhì或修饰肽段的定量和定性分析。质量精度图则展示测量质量与理论质量的偏差,是评估数据质量的重要指标。
dànbáizhì谱有哪些图谱的生成依赖于不同的质谱技术和实验设计。例如,数据依赖采集(DDA)通常用于发现蛋白zhìzǔxué,生成MS1和MS2图谱;而数据非依赖采集(DIA)则通过循环碎裂所有前体离子,生成复杂的混合MS2图谱,需借助谱图库进行解析。具体费用需要根据实验需求和样品情况来确定。此外,bǎxiàngdàn白zhìzǔxué技术(如PRM或SRM)通过选择性监测特定肽段,生成高灵敏度的EIC图谱,适用于低丰度dànbáizhì的jīngzhǔn定量。
dànbáizhì谱有哪些图谱的应用还扩展到翻译后修饰(PTM)研究。例如,磷酸化蛋白zhìzǔxué通过富集磷酸化肽段并结合MS2图谱中的中性丢失或特征离子,鉴定修饰位点。糖基化分析则依赖MS2图谱中的糖链碎片离子。这些应用进一步凸显了dànbáizhì谱有哪些图谱在功能蛋白zhìzǔxué中的重要性。
常见问题:
Q1. 如何选择适合dànbáizhì定量研究的图谱类型?
A:对于非biāojìdìng量(Label-free),MS1图谱的峰面积或峰高是主要依据;而biāojìdìng量(如TMT或iTRAQ)则依赖MS2图谱中报告离子的强度。DIA技术的定量基于MS2图谱的提取离子峰,适合大规模蛋白zhìzǔxué研究。
Q2. 为什么在dànbáizhì鉴定中MS2图谱比MS1图谱更关键?
A:MS1图谱仅提供肽段的质量信息,而MS2图谱通过碎片离子揭示了肽段的氨基酸序列,这是数据库匹配和dànbáizhì鉴定的直接证据。高覆盖度的MS2数据能显著提高鉴定率和可信度。
Q3. 如何评估dànbáizhì谱有哪些图谱的数据质量?
A:关键指标包括MS1的质量精度(通常要求<10 ppm)、MS2的碎片离子覆盖度、TIC的色谱峰对称性,以及EIC的信噪比(S/N)。此外,重复样品间的相关性分析也能反映数据重现性。
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文献和实验Adv Sci:林戈/薛愿超合作阐明 eIF4E1B 在哺乳动物卵母细胞向胚胎转换过程中母源 mRNA 选择性翻译的作用机制
,而 eIF4E1B 倾向结合在 mRNA 5′UTR 的 CCGCC 序列,这提示 mRNA 的非编码区存在特定的调控元件,这些元件可能调控卵母细胞内 mRNA 的选择性翻译激活。 此外,研究人员进一步通过蛋白质谱验证了 eIF4E1B 靶向结合的 mRNA 在蛋白水平的变化并利用免疫共沉淀-蛋白质谱鉴定并验证了与 eIF4E1B 相互作用参与翻译起始过程的蛋白互作网络,最后,研究团队预测了翻译起始因子 eIF4E1B 协同 3′UTR 结合蛋白选择性募集 5′UTR 富含 CCGCC 序列的 mRNA
基于质谱的蛋白质鉴定,第6节:MALDI-TOF-MS蛋白和肽样品的制备
物干燥,连续洗涤使用预制型的薄层基质。该方法为精确和灵敏的MALDI检测创造了最佳条件。然而,这种样品制备方法制备的样品不能承受激光辐射,会被迅速漂洗。因此,该方法不适用于PSD光谱的蛋白质谱鉴定,因为PSD光谱法通常每个片段质量范围需要多达100甚至以上次数反复的激光辐射。 如果在分析之前,使用小型吸附柱对较大体积的肽混合物进行浓缩,抑或通过向肽混合物中添加少量反相色谱珠的方式进行批量吸附。而进行批量吸附,只需要将磁珠吸附到的肽混合物进行洗涤,即可获得肽混合物,然后转移至上样处并干燥即可。这种
多篇 SCI 发现用 RIPA 提蛋白存在问题,我们该如何应对?
7 [3](下图),表明用 RIPA 裂解液提取这些特定蛋白质的效率十分低。近年来,越来越多的研究者密切关注 RIPA 不可溶组分中的蛋白质组分,以及它们对下游实验和整体数据的影响。Bai 和 Laiho 用 RIPA 裂解液从 Hela 细胞核中提取蛋白,发现可溶性组分和不可溶性组。分的蛋白质图谱差异很大,表明蛋白质的丢失不成正比 [4] (下图)。Mukhopadhyay 等 [5] 从突变小鼠的乳腺上皮细胞中提取总蛋白,发现在 RIPA 不可溶组分中,通过 WB 很容易检测到 EGFR, HSP
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