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- 2025年08月18日
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北京百泰派克生物科技有限公司
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液相二级质谱
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液相二级质谱技术原理与应用进展
在现代分析化学和生物医学研究中，液相二级质谱已成为复杂样品高通量分析的黄金标准。这项技术通过将液相色谱的高效分离能力与串联质谱的高灵敏度和特异性相结合，能够实现对复杂基质中痕量化合物的jīngzhǔn鉴定和定量分析。液相二级质谱的核心优势在于其dútè的选择反应监测模式，通过母离子选择、碰撞诱导解离和子离子检测的三步过程，显著提高了分析的选择性和信噪比。在dànbáizhì组学研究中，液相二级质谱能够同时鉴定数千种dànbáizhì及其翻译后修饰；在代谢组学领域，该技术可对数百种内源性代谢物进行准确定量；而在药物研发过程中，液相二级质谱则成为药代动力学研究和代谢物鉴定的关键技术平台。
液相二级质谱系统的硬件组成包括高效液相色谱仪、一级质量分析器、碰撞室和二级质量分析器四个主要部分。其中质量分析器的选择直接影响系统性能，目前常见配置包括四极杆-飞行时间串联质谱(Q-TOF)、线性离子阱-轨道阱组合(LTQ-Orbitrap)以及三重四极杆质谱系统。具体费用需要根据实验需求和样品情况来确定。碰撞诱导解离(CID)是液相二级质谱中zuì常用的碎裂技术，通过惰性气体碰撞使母离子获得内能并发生键断裂，产生特征性子离子谱图。近年来发展的高能碰撞解离(HCD)和电子转移解离(ETD)等新型碎裂技术，进一步拓展了该技术在dànbáizhì测序和翻译后修饰分析中的应用范围。
数据依赖性采集(DDA)和数据非依赖性采集(DIA)是液相二级质谱的两种主要工作模式。DDA模式根据一级质谱的离子强度实时选择前N个zuì强峰进行二级碎裂，适合已知化合物的靶向分析；而DIA模式则对所有进入质谱的离子进行无差别碎裂，更适用于发现性研究。在定量分析方面，多重反应监测(MRM)技术通过监测特定母离子-子离子对，可实现飞摩尔级别的检测灵敏度，已成为临床生物标志物验证的核心技术。液相二级质谱的数据分析流程涉及原始数据转换、数据库搜索和统计验证等多个环节，MaxQuant、Skyline等zhuānyè软件大大提高了数据处理效率和可靠性。
方法学验证是液相二级质谱应用的关键环节，包括线性范围、精密度、准确度、基质效应和稳定性等参数的评估。针对不同分析物特性，需要优化色谱条件(如流动相组成、梯度程序)和质谱参数(如碰撞能量、分辨率设置)。在临床dànbáizhì组学中，液相二级质谱已实现从发现研究到临床诊断的转化，如阿尔茨海默病生物标志物的验证；在环境分析领域，该技术可同时检测水体中数百种有机污染物及其代谢产物；而食品安全监测则利用液相二级质谱建立农药残留和兽药残留的高通量筛查方法。
常见问题：
Q1. 如何优化液相二级质谱的碰撞能量以获得zuì佳子离子产率？
A：碰撞能量优化需考虑母离子的m/z值和化学性质。对于小分子化合物，可采用能量斜坡实验，在10-50eV范围内以5eV为步长进行测试，选择产生zuì多特征性子离子且母离子保留5-15%强度的能量值。对于多肽分析，通常采用归一化碰撞能量(15-35%)，并需根据电荷状态调整，+2价离子比+3价离子需要更高能量。
Q2. 在DIA模式下如何解决谱图复杂度高导致的解析困难？
A：可采用谱图库辅助的解卷积策略，先通过DDA建立包含保留时间和碎片模式的参考谱图库，再使用Spectronaut或DIA-NN等软件进行匹配。另一种方案是结合离子淌度分离(如FAIMS或TWIMS)增加额外维度分离，降低共洗脱干扰。zuì新的深度学习算法如DeepDIA可直接从DIA数据中提取高质量谱图。
Q3. 液相二级质谱分析中如何有效校正基质效应？
A：推荐采用同位素标记内标法进行juéduì定量，内标与待测物具有相似的保留行为和电离效率。对于非靶向分析，可通过标准加入法或post-column infusion评估基质抑制/增强效应。色谱条件优化如延长梯度、改进样品前处理(如SPE净化)也能显著降低基质干扰。在数据采集时采用分段扫描或动态排除策略可减少高丰度基质离子的影响。
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文献和实验物。 那么多维度是指的哪些维度呢？一般情况下，基于液相色谱质谱的代谢组学目前鉴定和定性的维度有三个：RT（保留时间）；MS1（一级质谱）；MS2（二级质谱）；接下来给大家介绍一下三个维度的相关内容： RT：保留时间 RT：保留时间：是指从进样开始到某一组分浓度达到最大值所需要的时间，简单点说，就是该物质的实际出峰时间。理论上来说，一台相对稳定的色谱质谱联用仪，在色谱柱以及流动相等体系一致的情况下，单个代谢物的保留时间应该稳定在某个值的较窄范围内。 示例：下图展示了鹿明生物代谢组平台基于 3 个不同
液相杂交（solution hbridization）是指使变性的待测核酸单链与放射笥核素标记的已知的酸单链（探针）在溶液中保温，使之形成杂交复合物。反应结束后，用羟磷灰石法或酶解法将未被杂交的单链和杂交双链分开，然后结膈后在杂妆分子中的探针量，就可推算出被测的核酸量。
液相芯片体系由许多不同的小球体（Beads）为主要基质构成，每种小球体上固定有不同的探针分子，将这些小球体悬浮于一个液相体系中，就构成了一个液相蛋白质芯片系统，利用这个系统，我们可以对同一个样品中的多个不同的分子同时进行检测，这种检测技术我们称之为xMAP(flexible Multi-Analyte Profiling) 技术。 在液相系统中，为了区分不同的探针，每一种用于标记探针的球形基质都带有一个独特的色彩编号。在球形基质的制造过程当中
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