- ￥1955
- 经科
- JK-058
- 国产
- 2025年12月10日
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现货
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海经科化学科技有限公司
- 保存条件：
4℃
- 规格：
1ml
产品介绍
本公司生产的难转细胞专用转染试剂是一款适用于难转细胞的DNA专用转染试剂，可用于质粒DNA的高效传送。它具有极强的DNA转染能力，与其它转染试剂相比，具有转染效率高、不受血清影响、毒性低、稳定性好、转染简单易行、重复性好等优点。
应用范围
该转染试剂可适用于众多难转染细胞株的质粒DNA转染。适用于多种贴壁细胞系，特别适用于各种难转细胞如 BMDC、4T1、CT26、DC2.4等难转染细胞，均可得到较高的转染效率，且重复性好。
使用方法
质粒DNA的转染
以24孔板为例，请参考下表的转染规模调整，步骤如下:
1、细胞接种: 每孔接种0.5-1.0×105个细胞，细胞培养12-24小时，使转染时细胞密度达到60-70%融合度
2、质粒DNA稀释: 将0.5µg质粒DNA加入Opti-MEM培养基中，稀释后的终体积为10µL
3、转染试剂稀释: 取1μL的转染试剂加入到9μL的Opti-MEM培养基中，稀释后的终体积为10µL
4、复合物制备：将上述质粒DNA稀释液和转染试剂稀释液混合，轻轻吹打均匀后，室温静置10分钟
5、将上述20µL复合物加入到24孔板中，轻轻吹打混匀，继续培养18-48小时后检测转染效率，无需更换培养基
质粒DNA的转染优化
可通过改变细胞密度、DNA浓度以及转染试剂浓度对转染进行优化。保证细胞融合度在60%以上，转染试剂 (µL):DNA (µg)可以在1:1和5:1之间调整。
不同培养板所需转染试剂和DNA的用量
|
培养板 |
单孔面积 |
接种培养基 |
Opti-MEM稀释后终体积 |
DNA转染 |
|
|
试剂用量 |
DNA |
||||
|
96孔板 |
0.3cm2 |
200µL |
10µL |
0.4µL |
0.2µg |
|
24孔板 |
2cm2 |
500µL |
20µL |
1µL |
0.5µg |
|
12孔板 |
4cm2 |
1mL |
40µL |
2µL |
1µg |
|
6孔板 |
10cm2 |
2mL |
100µL |
4µL |
2µg |
|
60mm培养皿 |
20cm2 |
5mL |
200µL |
8µL |
4µg |
|
100mm培养皿 |
60cm2 |
15mL |
600µL |
24µL |
12µg |
运输保存
常温运输，2-8℃可保存一年。
注意事项
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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文献和实验棕色小玻璃瓶，标准包装10mg,20mg,50mg,100mg,或根据客户要求提供相应包装
向您的培养基供应者核对一下适当的 CO2 浓度。如果培养箱内培养条件与所需条件不一致（温度、湿度和 CO2）则会导致实验结果的板间变异。来自培养箱内的污染物、化学物质，或真菌 / 细胞的污染也都可能影响到细胞生理。 使用瞬时转染来生产蛋白瞬时转染表达蛋白 以往为了获得蛋白质的高表达产量，必须先转染细胞，然后挑选一个稳定的转染细胞系进行蛋白的扩增和富集。而挑选这样一个细胞系往往需要花费数周甚至数月的时间，这既可能是由于试剂的细胞毒性也可能是由于转染的低效率。如果是因为转染试剂具有细胞毒性，那么只有少数
50 代以内的细胞。50 代以后的细胞不建议采用，因为转染效率会随时间的推移而下降。 6.避免使用抗生素 从铺盘直到转染后 72 小时内，应避免使用抗生素。在转染的细胞中，已经显示出抗生素积累到了毒性水平。为获得最佳的siRNA输送效果，某些细胞和转染试剂需要无血清的条件。我们建议在正常的生长培养基和无血清培养基中均做转染试验，以确定每个转染实验的最佳条件。 7.使用优化的试剂转染 siRNA 请使用您的细胞类型适用的最佳 siRNA 转染试剂和试验方案。对于 siRNA 试验，转染试剂的选择
融合，也有自身环形形式存在的。与基因组融合后的质粒可以在细胞分裂的时候带给子细胞，所以可以用来筛选稳定细胞株。而有的质粒则在传代过程中丢失。每个转染细胞内的质粒数量就很难说了，看转染效率吧。从概率来说，当然是数量越多，蛋白表达会高一点，当然也不是绝对的。最常用的转染试剂包括磷酸钙、PEI、lipofectamine等等，还有各个生物公司有自己的试剂，质量应该也都不错。 bioenw 质粒转染的效率不如病毒转染的效率高，像慢病毒，可以稳定整合到基因组，子代也不会丢失
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