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- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
现货
- 保质期:
一年
- 供应商:
上海经科化学科技有限公司
- 保存条件:
4℃
- 规格:
1ml
产品介绍
本公司生产的悬浮细胞专用转染试剂是一款专用于悬浮细胞转染的DNA转染试剂,可用于质粒DNA在悬浮生长细胞中的传送。它适用于大规模蛋白生产,及工业化生产中的真核细胞转染。具有不受血清影响、毒性低、稳定性好、转染简单易行、重复性好等优点。
应用范围
该转染试剂特别适用于293F和CHO-S等悬浮细胞的转染。在有血清和无血清的条件下,均可得到较高的转染效率, 且重复性好。在大规模蛋白生产中,操作简单、蛋白表达量高、细胞 毒性低、细胞通用性好。
使用方法
质粒DNA的转染
以100ml培养瓶为例,请参考下表的转染规模调整,步骤如下:
1、细胞接种: 0.2-0.5×106/mL个细胞,接种于20mL培养基中,在37℃,120rpm,5%CO2 的条件下培养
2、质粒DNA稀释: 将10µg质粒DNA加入Opti-MEM培养基中,稀释后的终体积为50µL
3、转染试剂稀释: 取20μL的转染试剂加入到30μL的Opti-MEM培养基中,稀释后的终体积为50µL
4、复合物制备:将上述质粒DNA稀释液和转染试剂稀释液混合,轻轻吹打均匀后,室温静置10分钟
5、将上述100µL复合物加入到细胞培养瓶中,继续摇动培养,培养18-48小时后检测转染效率,无需更换培养基
质粒DNA的转染优化
可通过改变细胞密度、DNA浓度以及转染试剂浓度对转染进行优化。转染试剂 (µL):DNA (µg)可以在1:1和5:1之间调整。转染大于48h后,可通过适量添加培养基的方式延长转染时间。
不同培养瓶所需转染试剂和DNA的用量
|
培养瓶 |
细胞数量 |
接种培养基 |
Opti-MEM稀释后终体积 |
DNA转染 |
|
|
试剂用量 |
DNA |
||||
|
50mL |
0.5×106/mL |
10mL |
50µL |
10µL |
5µg |
|
100mL |
0.5×106/mL |
20mL |
100µL |
20µL |
10µg |
|
250mL |
0.5×106/mL |
50mL |
200µL |
50µL |
25µg |
|
500mL |
0.5×106/mL |
100mL |
400µL |
100µL |
50µg |
|
1L |
0.5×106/mL |
200mL |
2mL |
200µL |
100µg |
|
5L |
0.5×106/mL |
1L |
4mL |
1mL |
500µg |
运输保存
常温运输,2-8℃可保存一年。
注意事项
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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文献和实验棕色小玻璃瓶,标准包装10mg,20mg,50mg,100mg,或根据客户要求提供相应包装
悬浮细胞专用慢病毒是什么?Jurkat、K562、原代 T 细胞感染不上先看这篇
悬浮细胞专用慢病毒是什么?Jurkat、K562、原代 T 细胞感染不上先看这篇 做 Jurkat、K562、THP-1、原代 T 细胞或者 Raw264.7 的人几乎都遇过同一件事——常规慢病毒 MOI 拉到 100 以上,荧光还是稀稀拉拉,药筛完细胞先死一半。结论先说:这类细胞不是"病毒不行",而是常规慢病毒的载体骨架、启动子和感染增强液都是按贴壁细胞调的。换成悬浮细胞专用慢病毒(PRRL 骨架 + SFFV 启动子 + 悬浮专用增强液),感染效率和表达稳定性往往能直接翻上去。这是吉凯
100+ 种不同细胞全面验证— 翌圣生物转染试剂:高效低毒的国产优选
权威案例验证 原代鸡胚成纤维细胞(DNA) 原代小鼠神经干细胞(mRNA) 原代胶质母细胞瘤细胞(siRNA) 02 RNAiBoost-siRNA/miRNA 专用转染试剂 精准沉默,攻克难转体系 针对 siRNA/miRNA 转染 “敲低效率低、原代细胞难转、毒性大” 的行业痛点,翌圣生物依托 递送平台,研发出 RNAiBoost 专用转染试剂,专为 RNA 干扰场景优化,是原代细胞、悬浮细胞等难转
是否使用同一口径 是否设置阳性病毒和细胞状态对照 从“知道原理”到“真正能做” 包装最怕两件事:一是目的基因太大装不进或出毒差,二是悬浮/难转染细胞专用需求被忽略。常规慢病毒体系对普通贴壁细胞很成熟,但碰到原代、免疫、悬浮细胞,启动子和骨架得换。比如吉凯的悬浮细胞专用慢病毒,把载体骨架从 PFU 系列换成 PRRL 系列、启动子换成悬浮适用型(如 SFFV),再配悬浮专用转染试剂,滴度和稳定性明显更好。如果你不确定自己的基因大小、细胞类型该用哪套体系,先把这几个参数告诉服务商,让对方帮你定载体
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