- ￥1400
- 经科
- JK-055
- 国产
- 2025年12月10日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
现货
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海经科化学科技有限公司
- 保存条件：
4℃
- 规格：
1ml
产品介绍
本公司生产的悬浮细胞专用转染试剂是一款专用于悬浮细胞转染的DNA转染试剂，可用于质粒DNA在悬浮生长细胞中的传送。它适用于大规模蛋白生产，及工业化生产中的真核细胞转染。具有不受血清影响、毒性低、稳定性好、转染简单易行、重复性好等优点。
应用范围
该转染试剂特别适用于293F和CHO-S等悬浮细胞的转染。在有血清和无血清的条件下，均可得到较高的转染效率， 且重复性好。在大规模蛋白生产中，操作简单、蛋白表达量高、细胞 毒性低、细胞通用性好。
使用方法
质粒DNA的转染
以100ml培养瓶为例，请参考下表的转染规模调整，步骤如下:
1、细胞接种: 0.2-0.5×106/mL个细胞，接种于20mL培养基中，在37℃，120rpm，5%CO2 的条件下培养
2、质粒DNA稀释: 将10µg质粒DNA加入Opti-MEM培养基中，稀释后的终体积为50µL
3、转染试剂稀释: 取20μL的转染试剂加入到30μL的Opti-MEM培养基中，稀释后的终体积为50µL
4、复合物制备：将上述质粒DNA稀释液和转染试剂稀释液混合，轻轻吹打均匀后，室温静置10分钟
5、将上述100µL复合物加入到细胞培养瓶中，继续摇动培养，培养18-48小时后检测转染效率，无需更换培养基
质粒DNA的转染优化
可通过改变细胞密度、DNA浓度以及转染试剂浓度对转染进行优化。转染试剂 (µL):DNA (µg)可以在1:1和5:1之间调整。转染大于48h后，可通过适量添加培养基的方式延长转染时间。
不同培养瓶所需转染试剂和DNA的用量
|
培养瓶 |
细胞数量 |
接种培养基 |
Opti-MEM稀释后终体积 |
DNA转染 |
|
|
试剂用量 |
DNA |
||||
|
50mL |
0.5×106/mL |
10mL |
50µL |
10µL |
5µg |
|
100mL |
0.5×106/mL |
20mL |
100µL |
20µL |
10µg |
|
250mL |
0.5×106/mL |
50mL |
200µL |
50µL |
25µg |
|
500mL |
0.5×106/mL |
100mL |
400µL |
100µL |
50µg |
|
1L |
0.5×106/mL |
200mL |
2mL |
200µL |
100µg |
|
5L |
0.5×106/mL |
1L |
4mL |
1mL |
500µg |
运输保存
常温运输，2-8℃可保存一年。
注意事项
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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文献和实验棕色小玻璃瓶，标准包装10mg,20mg,50mg,100mg,或根据客户要求提供相应包装
对于此汉恒生物专门研发了对人、小鼠等物种的原代 T 细胞均具有很高感染效率的病毒：汉恒生物小鼠 T 细胞专用逆转录病毒 mTRv 或人 T 细胞专用慢病毒 hTLv，以及对两种 T 细胞效果都比较好的汉恒生物悬浮细胞专用腺病毒 ADS。 原代 T 细胞感染前，需要先进行 CD3/CD28 抗体和 IL-2 刺激激活 48h，再离心换新鲜 T 细胞完全培养基，进行病毒感染。原代 T 细胞为悬浮细胞，需要通过平角离心转染法，先重悬细胞，然后将适量的病毒液加入细胞培养皿后，封好口，放入平角离心机，1000
效率（血清会影响复合物的形成）。 转染用的培养液可以含血清也可以不加，如加血清则应在DNA-阳离子脂质体复合物形成后加入，转染培养基中加入血清需要对条件进行优化。 对于对血清缺乏比较敏感的贴壁细胞，建议使用专用转染试剂。条件允许情况下，可以用无血清培养基代替PBS洗细胞两遍，注意洗的时候要轻，靠边缘缓缓加入液体，然后不要吹吸细胞，而是转动培养板让液体滚动在细胞表面。如果洗的太厉害，细胞又损失一部分，加了脂质体后，细胞受影响就更大了，死亡细胞会增多。 02培养基中的抗生素（PS） 抗生素（如青霉
。 4、培养细胞时，如何去除血清来源的外泌体？ 多数情况下，细胞在体外培养时需要血清，而血清中一般都含有外泌体，为避免血清对细胞外泌体的污染，可采用以下两种方法： 将细胞培养用的血清通过 1×105g 超速离心 >10 h 以去除血清外泌体； 选择无血清完全替代培养基进行细胞培养。 5、无外泌体血清（或者外泌体专用培养基）在什么时候使用？ 使用无外泌体血清培养基：细胞在正常含血清的培养基中培养一定的时间后，细胞汇合度在60% - 70% 时，移去原有含血清的培养基，换成新鲜的无外泌体血清培养基，继续
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