- ￥600 - 2800
- 融合蛋白表达的原理
- 全国
- 2025年08月19日
企业认证
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 提供商：
北京百泰派克生物科技有限公司
- 服务名称：
融合蛋白表达的原理
- 规格：
询价
融合蛋白表达的原理及应用解析
融合蛋白表达的原理是通过基因工程技术将两个或多个蛋白的编码序列连接在一起，形成单一的多肽链。这一过程通常涉及将目标蛋白与一个或多个功能域（如标签蛋白、报告蛋白或稳定化结构域）融合，以实现特定的实验目的。融合蛋白表达的原理基于分子生物学的核心概念，即DNA序列的转录和翻译机制。通过设计适当的表达载体，将融合基因插入宿主细胞（如大肠杆菌、哺乳动物细胞或酵母）中，利用宿主细胞的dànbáizhì合成 machinery 产生目标融合蛋白。
在融合蛋白表达的原理中，选择合适的融合伴侣至关重要。常见的标签蛋白包括His-tag、GST（gǔguānggāntàiS-转移酶）、MBP（麦芽糖结合蛋白）和荧光蛋白（如GFP）。这些标签不仅有助于后续的蛋白纯化（如亲和层析），还能提高目标蛋白的溶解度或稳定性。例如，His-tag可通过镍柱纯化，而GST标签则利用gǔguānggāntài琼脂糖珠进行捕获。此外，某些融合伴侣（如SUMO或Trx）能显著减少包涵体形成，从而提高可溶性表达效率。
融合蛋白表达的原理还涉及表达系统的优化。原核系统（如大肠杆菌）成本低、操作简便，但缺乏翻译后修饰能力；真核系统（如CHO细胞或昆虫细胞）则适用于需要糖基化或其他复杂修饰的蛋白。启动子选择（如T7、CMV）、密码子优化以及诱导条件（如IPTG浓度、温度）均会影响zuì终产量。具体费用需要根据实验需求和样品情况来确定，但核心关注点仍在于如何高效、高纯度地获取功能性融合蛋白。
在应用层面，融合蛋白表达的原理支撑了多种研究，包括蛋白相互作用分析（如Pull-down实验）、结构生物学研究（如结晶辅助标签）以及治疗性蛋白开发（如抗体-药物偶联物）。例如，将目标抗原与Fc片段融合可延长其半衰期，而荧光蛋白融合则广泛应用于亚细胞定位研究。
常见问题：
Q1. 如何避免融合蛋白的蛋白酶降解？
A：可采用蛋白酶缺陷型宿主菌株（如大肠杆菌BL21(DE3)），或在培养基中添加蛋白酶抑制剂（如PMSF）。此外，选择稳定化标签（如MBP或SUMO）或低温诱导表达也能有效减少降解。
Q2. 融合蛋白表达后出现包涵体，如何优化可溶性表达？
A：可尝试降低诱导温度（如18-25℃）、调整IPTG浓度（0.1-0.5 mM）或共表达分子伴侣（如GroEL/ES）。若仍不理想，可更换融合标签（如Trx或SUMO）或采用真核表达系统。
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验CFS 无细胞蛋白表达与传统的基于大肠杆菌系统的蛋白表达相比，速度快，产量高，无包涵体困扰，对于膜蛋白、毒蛋白等特殊蛋白具有很强的适应性。其超高的表达效率和广泛的模板适应性可以大大加速实验流程，免去多次调试实验参数的困扰，特别适合各类蛋白结构和功能研究的客户使用，尤其适合因疫情导致实验延误的老师尽快赶上预期进度。
今天进行了GST融合蛋白的表达，pGEX-4T-1载体,BL21菌。 步骤：摇菌至A600：0.7，然后加IPTG诱导3小时，温度35度（终浓度：0.3mM)，取1ml诱导后菌，离心去培养基，冰冷PBS洗一次，离心，吸净液体，加入1*上样缓冲液50微升和终浓度1mM PMSF，100度煮菌5分钟，离心，取20微升上清跑胶。结果如图。 1.空载体对照有GST的表达 2.所有重组载体同样有GST大小的片断，（箭头 B） 3.箭头A所示的条带在空载体和重组载体处有明显差异。 4.我的目的
区位于N端时，fusion tag位于C端可能减少对其功能的影响，反之亦然。进行融合蛋白的表达经常会遇到三个问题，它们是：表达蛋白的溶解性、稳定性和fusion tag的存在。前两个问题在融合蛋白表达系统和非融合蛋白表达系统都会遇到，而第三个问题是融合蛋白系统所独有的。裂解融合蛋白以除去fusion tag 为了对目的蛋白进行生化及功能分析，通常要从目的蛋白上去除fusion tag部分。早期已建立了数种对融合蛋白进行位点特异性裂解的方法。化学裂解如溴化氰(Met↓)、BNPS-3-甲基吲哚(Trp↓
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
