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1.25ml
环介导等温扩增技术(Loop-Mediated Isothermal Amplification,LAMP)是一种新颖的核酸扩增方法。其基本原理是采用4/6条特异引物(针对基因的6/8个区域)及一种具有链置换活性的DNA聚合酶,在60-65℃对核酸进行等温扩增。本试剂采用新型的双功能Bst聚合酶3.0,具有反转录酶和聚合酶活性,可直接以RNA为模板进行扩增。可在8-30min完成扩增,大幅度缩短反应时间。产品中加入Eva Green荧光染料,若实现LAMP扩增,荧光PCR仪或等温扩增仪可检测到荧光信号,依据是否出现扩增S型曲线即可判断扩增阴阳性结果。本品的UDG/dUTP系统可防止气溶胶污染。
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文献和实验(BD Biosciences / Clontech). SYBR Green PCR master mix, 200 reactions (Applied Biosystems). Optical tube and cap strips (Applied Biosystems). SuperScript
1 0.1-0.5µM Primer 2 0.1-0.5µM 10X Reaction buffer 1X Magnesium 1.0-3.0mM dNTP mix 200 mM each dNTP Thermostable DNA polymerase 1-4 units/100 ml reactionRT-PCR基础 RT-PCR将以RNA为模板的cDNA合成同PCR结合在一起,提供了一种分析基因表达的快速灵敏的方法。RT-PCR用于对表达信息进行
Perhaps you could try it with normal Taq and add a bit of Sybr to your master mix prior to adding to samples? I don"t have any suggestions on concentrations - i"ve only ever used commercial kits. Maybe try Nick"s suggestion for some freebies... I"ve used Sigma
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