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q272974257
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上海科梦达生物
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文献和实验【原创】Protein A Sepharose 之进化篇。。。
洗脱条件比较剧烈,最后收集的蛋白质很有可能变性,或者是复性困难。 这种洗脱条件剧烈的Protein A 柱结合的重组蛋白质A一般具有5个串联结构域:E、D、A、B、C。这种重组蛋白A虽然除去了不重要的非结合域,仅由5个结构域组成,每个域均可以和IgG的Fc段结合,但不同的域结合强度略有差异。因此洗脱条件不均一,而且经常需要较低的pH值。如果减少串联结构域的个数,并且采取同型结构域串联,就可以避免不同结构域与抗体Fc 段亲和性的差异,洗脱条件会温和而均一。为此,我们可以做一个试验,比较一下
胶体金标记蛋白A技术(Protein A-gold technique PAg法)
PAg复合物制备方法简便,作为第二抗体,无种属特异性,可以免去不同种属动物要制备不同的特异性免疫球蛋白。PAg 复合物与包埋剂和细胞成分都极少发生非特异性的交互作用,蛋白A和金粒间非共价的结合特性既不影响蛋白A的活性,又能保持高度的稳定性,PAg复合物分子最小易于穿透组织。PAg复合物的原液在4℃可保存达一年之久。电镜水平的PAg染色法 PAg法在电镜技术的应用原则是二步标记法,可用于包埋前和包埋后染色。其主要区别于一般胶体金免疫染色在:①须1%卵白蛋白-PBs (pH7.4)或1%卵白
网络 第二节 葡萄球菌蛋白A(SPA) 葡萄球菌蛋白A(Staphylococal Protein A, SPA)是一种从金黄色葡萄球菌细胞壁分离的蛋白质。早在1940年,Vevwey发现在某些金黄色葡萄球菌中,含有一种物质,在双向扩散试验中能与正常人血清形成沉淀。Jensen(1959)也发现类似现象,并将其命名为A抗原。直到1963
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