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土壤外切-β-1,4-葡聚糖酶/纤维二糖水解酶(CBH)试剂

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  • ¥620 - 1060
  • wksubio
  • WS3230F
  • 国内
  • 2025年09月23日
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    • 英文名

      Soil Externalization- β- 1,4-neneneba glucanase/Cellobiose Hydrolase (CBH) Kit

    • CAS号

      WS3230F

    • 保质期

      3个月

    • 供应商

      上海瓦兰生物

    • 保存条件

      4℃

    • 规格

      24T/48T

    规格:24T产品价格:¥620.0
    规格:48T产品价格:¥1060.0
    本试剂盒仅供科研使用
    土壤外切-β-1,4-葡聚糖酶(S-CBH)活性测定试剂盒说明书
    (货号:WS3230F 分光法 48 )
    一、产品简介:
    土壤外切-β-1,4-葡聚糖酶又称土壤纤维二糖水解酶(CBHEC 3.2.1.91)是土壤纤维素
    酶系的组份之一,该酶作用于β-1,4-糖苷键,每次切下一个纤维二糖(还原糖)分子,本
    试剂盒采用该酶催化对硝*苯基-β-D-纤维二糖苷生成黄色物质对-硝*苯酚(PNP),该物
    质在 405nm 有特征光吸收,进而得到土壤外切-β-1,4-葡聚糖酶(S-CBH)活性大小。
    二、试剂盒组分与配制:
    试剂名称
    规格
    保存要求
    备注
    试剂一
    液体 90mL×1
    4℃保存
    试剂二
    粉体 mg×2
    4℃保存
    临用前每支加入 1.5mL 蒸馏水
    溶解,4 度保存。
    试剂三
    液体 20mL×1
    4℃保存
    标准品
    粉剂 mg×1
    4℃保存
    若重新做标曲,则用到该试剂。
    三、所需仪器和用品:
    可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、水浴锅或恒温振荡培养箱、可调式
    移液器、蒸馏水。
    四、土壤外切-β-1,4-葡聚糖酶活性测定:
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验
    样本和试剂浪费!
    1、样本制备:
    取新鲜土样或干土(风干或者 37 度烘箱风干),先粗研磨,过 40 目筛网备用。
    【注】:土壤风干,减少土壤中水分对于实验的干扰;土壤过筛,保证取样的均匀细腻;
    2、上机检测:
    ① 可见分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 405nm,蒸馏水调零。
    ② 在 EP 管中依次加入:
    试剂名称(
    μL
    测定管
    对照管
    空白管(仅做一次)
    土样(
    g
    0.1
    0.1
    试剂一
    750
    800
    750
    试剂二
    50
    50
    充分混匀,37℃培养 2 小时(振荡培养或间隔 20min 手动振荡混匀
    几下)
    试剂三
    200
    200
    200
    混匀,8000rpm 离心 5min(若上清液不澄清可加大离心力),取
    700μL 上清液至 1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)中,405nm 下读取
    吸光值 AA=A 测定- A 对照-A 空白(每个样本做一个自身对照)。
    【注】:1.ΔA 较小,可延长 37℃的孵育时间 T(如增至 4 小时或更长),或增加土样质
    W(如增至 0.3g)。则改变后的 T W 需代入计算公式重新计算。
    2.若测定管 A 值大于 1.5 A 大于 1.5,可缩短 37℃的孵育时间 T(如减至 0.5 小时或更
    短),或减少土样质量 W(如减至 0.05g)。则改变后 T W 需代入计算公式重新计算。
    或对最后一步的待检测上清液(包括测定管、对照管和空白管)同时用蒸馏水进行稀释,本试剂盒仅供科研使用
    2
    稀释倍数 D 代入计算公式。
    五、结果计算:
    1、标准曲线方程:y = 0.0141x + 0.0157x 为标准品摩尔质量(nmol),y A
    2、单位定义:每小时每克土样中产生 1nmol -硝*苯酚(PNP)定义为一个酶活单位。
    S-CBH 活力(nmol/h/g 土样)=(ΔA-0.0157)÷0.0141÷W÷T×D
    =35.5×(ΔA-0.0157)÷W×D
    T---反应时间,2h
    W---土壤样本实际取样量,g
    PNP 相对分子质量---139.11
    D---稀释倍数,未稀释即为 1
    附:标准曲线制作过程:
    1 制备标准品母液(10μmol/mL):向标准品 EP 管里面加入 1.4mL 蒸馏水超声溶解。
    2 把母液用蒸馏水稀释成以下浓度:0, 0.4, 0.8, 1.2, 1.6, 2μmol/mL。也可根据实际样本
    来调整标准品浓度。
    3 EP 管加入:50μL 标准品+750μL 试剂一+200μL 试剂三,混匀,取 200μL 96
    孔板中,于 405nm 下读取吸光值,根据结果制作标准曲线。

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