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- 详细信息
- 技术资料
- 库存:
大量
- 英文名:
Soil Externalization- β- 1,4-neneneba glucanase/Cellobiose Hydrolase (CBH) Kit
- CAS号:
WS3230F
- 保质期:
3个月
- 供应商:
上海瓦兰生物
- 保存条件:
4℃
- 规格:
24T/48T
| 规格: | 24T | 产品价格: | ¥620.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 48T | 产品价格: | ¥1060.0 |
本试剂盒仅供科研使用
土壤外切-β-1,4-葡聚糖酶(S-CBH)活性测定试剂盒说明书
(货号:WS3230F 分光法 48 样)
一、产品简介:
土壤外切-β-1,4-葡聚糖酶又称土壤纤维二糖水解酶(CBH,EC 3.2.1.91)是土壤纤维素
酶系的组份之一,该酶作用于β-1,4-糖苷键,每次切下一个纤维二糖(还原糖)分子,本
试剂盒采用该酶催化对硝*苯基-β-D-纤维二糖苷生成黄色物质对-硝*苯酚(PNP),该物
质在 405nm 有特征光吸收,进而得到土壤外切-β-1,4-葡聚糖酶(S-CBH)活性大小。
二、试剂盒组分与配制:
试剂名称
规格
保存要求
备注
试剂一
液体 90mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
粉体 mg×2 支
4℃保存
临用前每支加入 1.5mL 蒸馏水
溶解,4 度保存。
试剂三
液体 20mL×1 瓶
4℃保存
标准品
粉剂 mg×1 支
4℃保存
若重新做标曲,则用到该试剂。
三、所需仪器和用品:
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、水浴锅或恒温振荡培养箱、可调式
移液器、蒸馏水。
四、土壤外切-β-1,4-葡聚糖酶活性测定:
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验
样本和试剂浪费!
1、样本制备:
取新鲜土样或干土(风干或者 37 度烘箱风干),先粗研磨,过 40 目筛网备用。
【注】:土壤风干,减少土壤中水分对于实验的干扰;土壤过筛,保证取样的均匀细腻;
2、上机检测:
① 可见分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 405nm,蒸馏水调零。
② 在 EP 管中依次加入:
试剂名称(
μL)
测定管
对照管
空白管(仅做一次)
土样(
g)
0.1
0.1
试剂一
750
800
750
试剂二
50
50
充分混匀,37℃培养 2 小时(振荡培养或间隔 20min 手动振荡混匀
几下)
试剂三
200
200
200
混匀,8000rpm 离心 5min(若上清液不澄清可加大离心力),取
700μL 上清液至 1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)中,405nm 下读取
吸光值 A,△A=A 测定- A 对照-A 空白(每个样本做一个自身对照)。
【注】:1.若ΔA 较小,可延长 37℃的孵育时间 T(如增至 4 小时或更长),或增加土样质
量 W(如增至 0.3g)。则改变后的 T 和 W 需代入计算公式重新计算。
2.若测定管 A 值大于 1.5 或△A 大于 1.5,可缩短 37℃的孵育时间 T(如减至 0.5 小时或更
短),或减少土样质量 W(如减至 0.05g)。则改变后 T 和 W 需代入计算公式重新计算。
或对最后一步的待检测上清液(包括测定管、对照管和空白管)同时用蒸馏水进行稀释,本试剂盒仅供科研使用
2
稀释倍数 D 代入计算公式。
五、结果计算:
1、标准曲线方程:y = 0.0141x + 0.0157;x 为标准品摩尔质量(nmol),y 为△A。
2、单位定义:每小时每克土样中产生 1nmol 对-硝*苯酚(PNP)定义为一个酶活单位。
S-CBH 活力(nmol/h/g 土样)=(ΔA-0.0157)÷0.0141÷W÷T×D
=35.5×(ΔA-0.0157)÷W×D
T---反应时间,2h;
W---土壤样本实际取样量,g;
PNP 相对分子质量---139.11;
D---稀释倍数,未稀释即为 1。
附:标准曲线制作过程:
1 制备标准品母液(10μmol/mL):向标准品 EP 管里面加入 1.4mL 蒸馏水超声溶解。
2 把母液用蒸馏水稀释成以下浓度:0, 0.4, 0.8, 1.2, 1.6, 2μmol/mL。也可根据实际样本
来调整标准品浓度。
3 在 EP 管加入:50μL 标准品+750μL 试剂一+200μL 试剂三,混匀,取 200μL 至 96
孔板中,于 405nm 下读取吸光值,根据结果制作标准曲线。
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土壤外切-β-1,4-葡聚糖酶/纤维二糖水解酶(CBH)试剂盒
¥620 - 1060










