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还原型谷胱甘肽(GSH)含量试剂盒

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  • ¥200
  • wksubio
  • WS6020F
  • 国内
  • 2025年10月20日
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    • 英文名

      Reduced Glutathione (GSH) Content Kit

    • CAS号

      WS6020F

    • 保质期

      3个月

    • 供应商

      上海瓦兰生物

    • 保存条件

      4℃

    • 规格

      48T

    本试剂盒仅供科研使用
    还原型谷胱甘肽(reduced glutathione, GSH)含量试剂盒说明书
    (货号:WS6020F 分光法 48 样)
    一、产品简介:
    还原型谷胱甘肽 GSH 是细胞内最主要的抗氧化巯基物质,在抗氧化、蛋白质巯基保护和氨基酸跨膜运
    输等中具有重要作用。还原型与氧化型比值(GSH/GS SG)是细胞氧化还原状态的主要动态指标。因此,
    测定细胞内 GSH GS SG 含量以及 GSH/GS SG 比值,能够很好地反映细胞所处的氧化还原状态。
    还原型谷胱甘肽 GSH DTNB 与反应生成复合物,在 412nm 处有特征吸收峰;其吸光度与 GSH 含量
    成正比。
    二、试剂盒组分与配制:
    试剂名称
    规格
    保存要求
    提取液
    液体 50mL×1
    4℃保存
    试剂一
    液体 60mL×1
    4℃保存
    试剂二
    液体 8mL×1
    4℃保存
    若凝固,可在 25℃水浴温育片
    刻至全部融解后使用。
    标准品
    粉体 mg×1
    4℃保存
    若重新做标曲,则用到该试剂。
    三、所需的仪器和用品:
    可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、低温离心机、水浴锅、可调节移液器
    四、还原型谷胱甘肽(GSH)含量的测定:
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实
    验样本和试剂浪费!
    1、样本制备
    ① 组织样本:称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液,进行冰浴匀浆。4×12000rpm
    15min,取上清液,置冰上待测。
    【注】:根据实验室条件,可先液氮研磨,再加提取液,进行冰浴匀浆
    根据研究需求,可按组织质量(
    g):提取液体积(mL)110 的比例进行提取。
    ② 细菌/细胞样本:
    先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液;
    超声波破碎细菌或细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);4×12000rpm
    离心 15min,取上清液置冰上待测。
    【注】:若增加样本量,可按照细菌或细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~10001 的比例
    进行提取
    ③ 液体样本:直接检测。若浑浊,离心后取上清检测。
    2、上机检测
    ① 可见分光光度计预热 30min,调节波长到 412nm,蒸馏水调零。
    ② 所有试剂在使用前需在 25℃水浴中保温 10min
    ③ 在 1mL 玻璃比色皿中依次加入:
    试剂名称(
    μL
    测定管
    对照管
    样本
    80
    80
    试剂一
    480
    640
    试剂二
    160
    立即混匀,静置5min后,在412nm波长下分别读取吸光值A
    A=A测定管﹣A对照管。本试剂盒仅供科研使用
    2
    【注】1. 若是同一批样本检测,样本对照管做一个即可。
    2. 若△A 值在零附近徘徊,可以增加样本取样质量(如增至 0.2g)或加大上样量(如增
    160μL,试剂一相应减少)。
    五、结果计算:
    1、标准曲线为 y = 1.5403x + 0.0049x 为标准品浓度(
    μmol/mL),y 为ΔA
    2. 按蛋白浓度计算:
    GSH(μmol/ mg prot)=[(A-0.0049)÷1.5403×V1]÷(V1×Cpr)=0.65×(A-0.0049)÷Cpr
    3. 按样本鲜重计算:
    GSH(μmol/g 鲜重)=[(A-0.0049)÷1.5403×V1]÷(W×V1÷V)=0.65×(A-0.0049)÷W
    4. 按细胞数量计算:
    GSH(μmol/104 cell)=[(A-0. 0049) ÷1.5403×V1]÷(细胞数量×V1÷V)
    =0.65×(A-0.0049) ÷细胞数量
    5. 按液体体积计算:
    GSH(μmol/mL)=[(A-0.0049)÷1.5403×V1] ÷V =0.65×(A-0.0049)
    V---上清液总体积,1mLV1---加入反应体系中上清液体积,80μL=0.08 mL
    W---样品质量,g
    Cpr---蛋白质浓度,mg/mL;建议使用本公司的蛋白含量检测试剂盒。
    注意事项:上清液不能用于蛋白质浓度测定。
    附:标准曲线制作过程:
    1 制备标准品母液(1μmol/mL):标准品溶于 4mL 蒸馏水中,(母液需在两天内用且
    -20℃保存)。
    2 把母液用蒸馏水稀释成六个浓度梯度的标准品:0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1. μmol/mL。也
    可根据实际样本来调整标准品浓度。
    3
    依据测定管的加样体系操作,根据结果即可制作标准曲线。

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