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- wksubio
- WS5310F
- 国内
- 2025年10月20日
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- 详细信息
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
Polyamine Oxidase (PAO) Kit
- CAS号：
WS5310F
- 保质期：
3个月
- 供应商：
上海瓦兰生物
- 保存条件：
4℃
- 规格：
48T
本试剂盒仅供科研使用
多胺氧化酶（Polyamine oxidases，PAO）试剂盒说明书
（货号：WS5310F 分光法 48 样）
一、产品简介：
多胺氧化酶（PAO，EC 1.5.3.3）广泛存在于动物、植物和微生物中。催化多胺氧化为
醛，其活性与核酸和蛋白合成密切相关。也与植物逆境生理有一定关系。
PAO 催化多胺产生醛和过氧化氢，产物过氧化氢与 4-氨基氨替吡啉等反应产生一种
有色物质，其在 510nm 处有最大吸收峰。通过检测 510nm 处吸光值的变化量得出 PAO
酶活性大小。
二、试剂盒组成和配置：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 60mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
液体 6mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
液体 26mL×1 瓶
4℃保存
试剂三
粉剂 mg×1 瓶
4℃保存
用前甩几下使试剂落入底部，
再加 5mL 蒸馏水溶解备用。
三、所需的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、可调式移液器、天平、低温离心机、
蒸馏水。
四、多胺氧化酶（PAO）活性测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：
称取约 0.1g 组织（水分充足的样本可取 0.5g），加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。 4℃
×12000rpm 离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（
g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取。
② 细菌/细胞样本：
先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细胞加入 1mL
提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；
12000rpm 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104）：提取液（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取。
③ 液体样本：直接检测；若浑浊，离心后取上清检测。
2、上机检测：
① 可见分光光度计预热 30min，调节波长至 510nm，蒸馏水调零。
② 所有试剂解冻至室温（25℃）。
③ 在 1mL 玻璃比色皿中依次加入：
试剂名称（µL）
测定管
样本
60
试剂一
120
试剂二
520
试剂三
80
混匀，30℃下，立即在 510nm 处读取吸光本试剂盒仅供科研使用
2
值 A1，30min 后读取 A2，△A=A2-A1。
【注】 若△A 差值较小，则需增加样本量 V1（如增至 120µL，则试剂二相应减少），或延
长反应时间 T（如增加至 1h 或更长），则改变后的加样体积 V1 和反应时间 T 需
加入计算公式重新计算。
五、结果计算：
1、按样本蛋白浓度计算：
酶活定义：每毫克组织蛋白每分钟在反应体系中使 510nm 处吸光值变化 0.005 为一个酶活
单位。
PAO（△OD510 /min/mg prot）=ΔA÷(V1×Cpr)÷0.005÷T =111.1×ΔA÷Cpr
2、按样本质量计算：
酶活定义：每克组织每分钟在反应体系中使 510nm 处吸光值变化 0.005 为一个酶活单位。
PAO 活性（△OD510 /min/g 鲜重）=ΔA÷(W× V1÷V)÷0.005÷T=111.1×ΔA÷W
3、按细胞数量计算：
酶活定义：每 104个细胞每分钟在反应体系中使 510nm 处吸光值变化 0.005 为一个酶活单位。
PAO 活性（△OD510 /min/104cell）=ΔA÷(500×V1÷V)÷0.005÷T=0.22×ΔA
4、 按液体体积计算
酶活定义：每毫升液体每分钟在反应体系中使 510nm 处吸光值变化 0.005 为一个酶活单位。
PAO 活性（△OD510 /min/mL）=ΔA÷V1÷0.005÷T=111.1×ΔA
V---加入提取液体积，1mL；
V1---反应中样本体积，0.06mL；
W---样本质量，g；
T---反应时间，30min
Cpr---样本蛋白浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
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多胺氧化酶(PAO)试剂盒
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