- ￥1000
- 赛泓瑞生物
- 进口
- SHC1046H
- 2025年07月20日
企业认证
相关产品推荐更多 >
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 供应商：
SHCC
- 运输方式：
干冰/常温
- 年限：
10年
- 生长状态：
贴壁/悬浮
- 规格：
1*10^6cell/T25
|
种属 |
人 |
|
别称 |
HEK-293-F; HEK 293-F; HEK-293F; HEK293F; 293-F; 293 F; 293F |
|
组织来源 |
胎儿肾脏 |
|
疾病 |
转化细胞系 |
|
传代比例/细胞消化 |
1:2传代 |
|
完全培养基配置 |
悬浮培养用特制无血清培养基；贴壁培养用MEM-EBSS + NEAA + 10%FBS |
|
形态 |
上皮细胞样 |
|
生长特征 |
贴壁生长,悬浮生长 |
|
倍增时间 |
每周 2 至 3 次 |
|
STR |
Amelogenin：X；CSF1PO：7，12；D13S317：12，14；D16S539：,9,13；D18S51：17,18；D6S1043：11；D21S11：28,30.2；D2S1338：19；D3S1358：15,17；D5S818：8,9；D7S820：11；D8S1179：12,14；FGA：23；Penta E：15；vWA：16,19； |
|
培养条件 |
气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。 |
|
冻存条件 |
冻存液：90%FBS，DMSO 10%, 或使用非程序冻存液：官网货号SH-H040 |
|
保藏机构 |
CCRID; 1101HUM-PUMC000393 |
|
备注 |
该细胞为悬浮细胞，请注意离心收集细胞悬液，请勿直接倒掉细胞培养液。 |
|
产品使用 |
仅限于科学研究，不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用。 |
1）复苏细胞：将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6 cm皿中，加入约4 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
- 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
- 加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02%EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-3 min（视细胞情况而定），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。
- 将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。
a、收集细胞，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验系是不稳定的，可能随着培养时间的改变，培养条件的不同，不同的选择压力，可能引起不同的克隆选择。因此就算是同一个细胞系，在不同条件下转染能力的差异可能会很大。载体核酸：首先要保证所转染核酸的正确性和完整性，超螺旋结构和舒展结构之间比例、双螺旋中断、核酸酶的降解，以及来自于储存和处理过程中的物理压力和污染物（如内毒素等）都会影响到转染效率。其次是载体构造，如启动子、增强子、Ori 等。转染体系中一般都带有强病毒调节元件 （如 RSV、CMV 和 SV40） 的对照载体进行优化和比较。然而，病毒启动子、增强
被紫外毒害，可谓是「穷苦」实验室首选妙法）。5 酶切连接转化酶切回收片段及载体后，将载体：DNA 片段 = 1：8 加到连接体系，16 度用 T4 酶连接 15 min，或更久，转化到感受态即可。6 鉴定：挑克隆摇菌如果赶时间的话可以边挑菌边鉴定。用 Taq Premix 做鉴定即可。鉴定完送测菌液。之后找公司索要正确序列对应的质粒，至此就得到了您想要的克隆。最后可能会遇见的问题，在实验过程中如果遇见要构建的蛋白没有很好用的抗体，或者做体外 co-IP 等相关实验，需要构建一个融合蛋白，方便之后
4 度过夜4. 转化将连接产物转化到受体菌中（一般为 DH5a），涂板，培养过夜。5. 挑取单克隆，并鉴定挑去平板上的单克隆培养，可以通过 PCR 或者酶切初步鉴定阳性克隆，对初步鉴定出来的阳性克隆进行测序。 贰 下面开始重点介绍重组酶构建质粒，基于同源基因重组原理，适用于向几乎任何载体在任何位点进行定向克隆，无需考虑插入片段自身携带的酶切位点可高效克隆 50 bp～10 kb 片段，同时构建时间也大大缩短。1. 载体的制备一般推荐双酶切线性化，线性化完全，假阳性克隆低。酶切体系同上。2. 对于使用
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
