- ￥900
- 赛泓瑞生物
- 进口
- SHC765H
- 2025年07月20日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名：
SHCC
- 库存：
100
- 供应商：
赛泓瑞生物
- 细胞类型：
人绒毛膜癌细胞JEG-3(STR鉴定正确)
- 运输方式：
干冰/常温
- 年限：
10年
- 生长状态：
贴壁/悬浮
- 规格：
1*10^6cell/T25
1）复苏细胞：将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6 cm皿中，加入约4 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
- 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
- 加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02%EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-3 min（视细胞情况而定），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。
- 将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。
a、收集细胞，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
南京赛泓瑞生物科技有限公司专注于是一家专注于研发和生产原代细胞、肿瘤细胞及细胞培养相关试剂产品的生物高科技企业，可以为各类研究机构提供符合标准规范的原代细胞、肿瘤细胞及相关实验技术服务；
南京赛泓瑞生物科技有限公司有一支由南京大学和南京医科大学多名博士组成的研发团队，致力于为您的细胞研究及细胞培养实验提供高品质、稳定性良好的产品，做“您身边的细胞培养专家”。细胞培养提供全程服务，产品涵盖原代细胞、细胞系、免疫细胞及干细胞、胎牛血清、无血清非程序冻存液、完全培养基、基础培养基、“支原体”/“黑胶虫”清除试剂、细胞因子、胰酶、双抗等细胞培养及实验相关产品。
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文献和实验据统计约 30% 细胞系被交叉污染或错误辨识，因使用了交叉污染或错误辨识的细胞而导致研究结论错误、结果不可重复、临床细胞治疗灾难性后果……，这浪费大量时间、精力和金钱。Everything was going along fine until they discovered their HeLa cell line expressed Y chromosome markers因此近年 NIH、ATCC、Nature 和 Science 等对此多次发出呼吁，要求研究者对细胞进行鉴定。STR 基因
最初，用0.25%胰酶消化液传代，细胞脱壁容易，但是，吹打细胞180次左右，也只有80％细胞是单个细胞，而且，易引起细胞机械性损伤。于是，我改进方法。 现在，我的处理如下： 弃旧培养液 0.02％EDTA作用2分钟 弃EDTA 0.1％胰酶作用30秒 弃胰酶，继续消化2分钟 加培养液终止消化。一般吹打细胞30－40次，细胞基本为单个。 EDTA是一种化学螯合剂，主要作用主任已说。我要提醒一下：EDTA作用不受血清抑制，故消化后需彻底清除，否则影响细胞生长。 建议：可能的话离心
基因组 DNA 为模板进行 PCR 扩增，电泳确认 PCR 产物大小，对大小正确的产物进行测序，如测序结果与理论序列一致，则确认该基因编辑小鼠模型为正确重组模型。 TIPS 双臂 PCR 产物需测通：我们在实践中发现，即使 Donor 序列完全正确，部分鼠会存在突变或片段缺失的情况，我们推测是细胞在 Donor 重组前或过程中对 Donor 发生了编辑或重组后结构不稳定等原因所致，所以只对 Donor 各个部分接头测序是不严谨的，建议测通。 下面以 CKO 模型鉴定为例说明双臂 PCR 鉴定
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