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文献和实验【专题讨论】杆状病毒——昆虫细胞蛋白表达系统,影响蛋白表达的因素?
-6及阳性对照Bacmid/CAT,已构建成功。 2. 昆虫细胞Sf9、High Five及其相关培养基、转染试剂均购自Invitrogen公司。抗His单克隆抗体购自Oncogene公司,CAT-ELISA试剂盒购自 Roche。 实验步骤: 一、 昆虫细胞转染: 1. Sf9细胞计数,取6孔板中的两孔,每孔加入9×10 5个细胞(其中一孔设为正常对照),并以全培培养至少1小时,使细胞贴壁。 2. 准备重组质粒和细胞转染试剂的混合物: a. 溶解1μg纯化重组杆状
的ATG位点与5'attB位点的相对位置如何? 这取决于你是想表达一个融合或一个天然蛋白。对于一个N-末端融合蛋白,ATG位点会位于attb1位点的上游(在目标载体中)。而对于一个天然蛋白的表达,会在attB1位点下游找到ATG位点。 att位点会影响蛋白的表达吗? 即使attB位点将8个或9个氨基酸加到融合蛋白中去,我们也没有观察到att位点影响蛋白的表达或稳定性的情况。在大肠杆菌,昆虫或是哺乳动物细胞或是在酵母中的双杂交反应中,attB1编码
Detailed guide in degenerate PCR, including primer design, reaction conditioning and product analysis. ・ Degenerate PCR-A Short Guide (Atle M. Bones) PCR-Elisa ・ PCR-Elisa (NUNC) Run PCR with internal amplification
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