兔磷酸化P38(P-P38)ELISA科研试剂盒

p-p38的Wb问题

yzzaici888 大家好，本人最近一直在做p-p38的磷酸化，但是一直都做不好。希望各位大侠帮助解决： 蛋白上样量80-100ug，半干转膜70min，5%BSA封闭70min，一抗CST（#9211） 1：500加，4℃孵育过夜，二抗1:8000加室温70min。曝光出的结果很不好，杂带很多，也分析不出那条是目的条带，且没有趋势，见下图 15001046419

【求助】急急求助答案——关于SB203580抑制P38MAPK的自身磷酸化

203580预处理，能够降低P-P38的表达，而上游的MKK3/6没有活化，则说明此处的P38是通过自身磷酸化，而且SB203580可以抑制它的自身磷酸化） 不知道我的理解是否正确，请高手指点，谢谢！ kern6549 可以理解为SB203580是抑制P38的激酶活性的，而它的激酶活性的底物有两种，一种是自己（反映为自身的磷酸化），一种是下游的底物，SB203580能够同时抑制这个过程。 但是SB203580不能影响P38上游的激酶对其的活化过程

【求助】多少数量的细胞可以提磷酸化蛋白做western blot？

dongfangzhizi06 我要做信号通路(ERK和p38)，请问多少数量的细胞可以提磷酸化蛋白做western blot检测p-ERK1/2和p-p38？六孔板的一个孔够吗？ 谢谢！ 民间恺撒 上次我接板时的密度是5×105，提了四个孔的总蛋白，大概浓度在8.5左右。建议6孔板可以使用两个孔叠加在一起，这样蛋白浓度会有所保证。 bianbenjamin 我都是六孔板一个孔做