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100+
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上海维亦特生物
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48T/96T
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文献和实验表达系统的局限性还在于分泌产物的不均一性,包括聚合体的存在、信号肽加工不完全以及内部降解等现象。所有这些都提醒我们在Pp中表达外源蛋白时,应周密考虑影响其表达的各个因素。甲醇酵母可以在以甲醇为唯一碳源和能源的培养基中生长。这是因为其细胞中含有甲醇代谢途径的必需酶,如醇氧化酶(AOX)、二羟丙酮合成酶和过氧化氢酶等,其中AOX是甲醇酵母利用途径中的第1个酶,它催化甲醇被氧化为甲醛和过氧化氢。过氧化氢进一步由过氧化 氢酶分解成水和氧。甲醛在胞浆内被甲醛脱氢酶(FMD)和甲酸脱氢酶(FMDH)氧化成二氧
却表达良好。因此,可以通过调整高A+T含量区的核甘酸组成来避免提前终止的发生。而Sreekrishna等通过调整人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)的mRNA5'非翻译区与醇氧化酶(alcohol oxidase 1,AOX1)的5'非翻译区相同后,HSA的表达量可以提高50倍以上。但遗憾的是,限于目前对Pp的了解程度,仍然无法预见某种外源蛋白是否能在其中获得高产甚至仅仅能否表达。至仅仅能否表达。 2、表达框的染色体整合位点和方式 虽然相对于自主复制载体来讲
酵母、甲醇酵母等,其中,甲醇酵母表达系统是目前应用最广泛的酵母表达系统。目前甲醇酵母主要有H Polymorpha,Candida Bodini,Pichia Pastris3种。以Pichia Pastoris应用最多。 甲醇酵母的表达载体为整合型质粒,载体中含有与酵母染色体中同源的序列,因而比较容易整合入酵母染色体中。大部分甲醇酵母的表达载体中都含有甲醇酵母醇氧化酶基因一1(A0x1),在该基因的启动子(PAXOI)作用下,外源基因得以表达。PAXOI是一个强启动子,在以葡萄糖或甘油为碳源时
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