1H-Indazole-5-carbohydrazide

ELISPOT标准操作程序（protocol）

h。 注意： 碰撞会引起细胞移位，造成斑点模糊、拖尾。在整个培养过程中应避免移动、碰撞培养板，并尽量减少开关培养箱的次数。第三天：培养后操作（不再需要无菌操作） 1、裂解细胞 倾倒孔内的细胞及培养基，200μL/孔加入冰冷的去离子水，4C冰浴10min（低渗法裂解细胞）。 2、洗涤 每孔加入200μLPBST，浸泡3-5mins后扣出洗涤液，重复5次。最后一次，在吸水纸上扣干。 3、加入检测抗体 每孔加入100μL稀释好的生物素标记检测抗体，37°C孵育1h。 4、 洗涤 每孔加入

Western Blot(免疫印迹法)步骤

减小，膜对低分子量蛋白的结合就越牢固。 通常用 0.45μ m 和 0.2μm 两种规格的 NC 膜。 大于20kD 的蛋白可用 0.45μm 的膜， 小于 20kD的蛋白就要用 0.2μ m 的膜了， 如用0.45μ m 的膜就会发生“Blowthrough”的现象。PVDF 膜灵敏度、分辨率和蛋白亲和力比常规的膜要高，非常适合于低 分子量蛋白的检测。但 PVDF 膜在使用之前必需用纯甲醇浸泡饱和 1-5 秒钟。 蛋白质常用的转移方法主要有两种：槽式湿转和半干转移。前者操作容易

正常小鼠原代真皮纤维原细胞培养

抗体，荧光标记二抗，乙醇丙酮混合液（1：1）二、实验器械1、培养皿2、培养瓶3、直剪和眼科剪4、眼科镊5、玻璃滴管6、15ml离心管7、200目网筛三、实验流程取材↓取皮片，削成厚度为0.5mm的皮片↓皮片浸泡在75%酒精中消毒↓1 × PBS （pH 7.4 ）清洗皮片两遍↓皮片剪成（3-5）mm×（10-15）mm大小↓置于消化液中4℃消化过夜↓剥去表皮，并刮去真皮下的其他组织↓将组织块剪成1mm3 左右↓加入消化液，37℃消化至消化液浑浊↓停止消化，悬液过200目网筛↓收集细胞悬液，800