- ￥8097
- AAT Bioquest
- 进口
- 36390
- 2025年07月14日
企业认证
相关产品推荐更多 >
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名：
Cell Meter™ Beta-Arrestin Translocation GPCR Signaling Kit
- 库存：
50
- 供应商：
广州市左克生物科技发展有限公司
- 规格：
100Tests
| Ex (nm) | - | Em (nm) | - |
| 分子量 | - | 溶剂 | Water |
| 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
所有G蛋白偶联受体（GPCR）在通过配体结合后，都会通过一条共同途径迅速发生脱敏作用。 β-arrestin（一种细胞质蛋白）与受体的结合使GPCR信号失活，并启动了受体向细胞内的易位，在此细胞中配体被去除，受体被循环回到细胞膜。通过将荧光标记（例如GFP）附着到β-arrestin，可以检测受体arrestin复合物的位置。由于脱敏仅发生在受体上，因此检测β-arrestin的易位和随后的受体再循环提供了检测GPCR靶标可靠方法。 Cell Meter Beta-Arrestin蛋白易位GPCR信号试剂盒提供了功能强大的功能分析，可通过荧光成像筛选目标化合物针对已知或孤立GPCR靶标的活性。靶向GPCR的诱导荧光向细胞膜和内吞囊泡的移位。
适用仪器
| 荧光显微镜 | |
| Ex: | FITC滤波片组 |
| Em： | FITC滤波片组 |
| 推荐孔板: | 黑色透明底板 |
样品实验方案
概述
准备细胞进行转染
准备Transfectamine 5000-DNA混合物
将Transfectamine 5000-DNA混合物添加到细胞培养物中，并孵育过夜
转染后24-30小时将转染的细胞转移到96孔板中，并将培养物孵育过夜
在荧光显微镜下分析由GPCR引起的转运
细胞准备
细胞密度在转染时它们将达到约60-70％的融合度。
转染前用新鲜的生长培养基替换。
注意：例如，对于6孔板，每孔替换为2 mL培养基，对于10 cm板，则替换为6 mL培养基。
储备溶液配制
除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。避免重复冻融循环。
β-arrestin-GFPDNA储备溶液
向小瓶β-arrestin-GFPDNA（组分A）中加入10 µL ddH2O，充分混合至终浓度为1 µg / µL。
操作步骤
1.将3 µg DNA（例如1.5 µg Beta-arrestin-GFP DNA储备液和1.5 µg您准备的GPCR DNA）与200 µL无血清培养基混合。
2.向混合物中加入9 µL Transfectamine 5000（组分B）。
3.充分混合并在室温下孵育20分钟。
注意：Transfectamine 5000和DNA的比例需要针对不同的细胞系进行优化，通常，在我们的测试中，Transfectamine 5000转染试剂（µL）与DNA（µg）的比例应为3-5 µL：1ug。
表1. 6孔板和10 cm板的样本表
| 6孔板（每孔） | 10cm板 | |
| 新鲜培养基 | 2 mL | 6 mL |
| 质粒 | 3 µg | 10 µg |
| 无血清培养基 | 200 µL | 600 µL |
| Transfectamine 5000转染试剂 | ~9 µL | ~30 µL |
转染和转运方案
1.将Transfectamine 5000 -DNA混合物添加到培养板中，并孵育过夜。
注意事项：在转染后16小时即可检测到重组蛋白。转染后72〜96小时可观察到大表达水平。
2.转染后24-30小时将转染的细胞转移到96孔板中，并孵育过夜。
使用FITC滤光片（Ex / Em = 488/530 nm）在荧光显微镜下检测受体诱导的β-arrestin易位。
图示
图1. HeLa细胞中β-arrestin的易位。 HeLa细胞用β-arrestin-GFP和加压素受体2（V2R）瞬时转染。 HeLa细胞在6孔板中培养，并融合至〜60％。用9 µL Transfectamine 5000转染等量的β-arrestin-GFP（1.5 µg）和V2R质粒（1.5 µg）。转染后约30小时，将细胞转移到96孔板中。转染后约48小时，将加压素（1 µM）加入细胞中以诱导β-arrestin-GFP易位。使用FITC通道在荧光显微镜下加压素处理之前和之后2小时拍摄图像。
参考文献
Screening cellular feature measurements for image-based assay development.
Authors: Logan, David J and Carpenter, Anne E
Journal: Journal of biomolecular screening (2010): 840-6
Kappa opioid receptor screen with the Tango beta-arrestin recruitment technology and characterization of hits with second-messenger assays.
Authors: Doucette, Christopher and Vedvik, Kevin and Koepnick, Elizabeth and Bergsma, Aaron and Thomson, Brian and Turek-Etienne, Tammy C
Journal: Journal of biomolecular screening (2009): 381-94
Multiplexed assays by high-content imaging for assessment of GPCR activity.
Authors: Ross, D A and Lee, S and Reiser, V and Xue, J and Alves, K and Vaidya, S and Kreamer, A and Mull, R and Hudak, E and Hare, T and Detmers, P A and Lingham, R and Ferrer, M and Strulovici, B and Santini, F
Journal: Journal of biomolecular screening (2008): 449-55
Comparison of G-protein coupled receptor desensitization-related beta-arrestin redistribution using confocal and non-confocal imaging.
Authors: Haasen, Dorothea and Wolff, Michael and Valler, Martin J and Heilker, Ralf
Journal: Combinatorial chemistry & high throughput screening (2006): 37-47
High-content screening of known G protein-coupled receptors by arrestin translocation.
Authors: Hudson, Christine C and Oakley, Robert H and Sjaastad, Michael D and Loomis, Carson R
Journal: Methods in enzymology (2006): 63-78
High-throughput confocal microscopy for beta-arrestin-green fluorescent protein translocation G protein-coupled receptor assays using the Evotec Opera.
Authors: Garippa, Ralph J and Hoffman, Ann F and Gradl, Gabriele and Kirsch, Achim
Journal: Methods in enzymology (2006): 99-120
The ligand-independent translocation assay: an enabling technology for screening orphan G protein-coupled receptors by arrestin recruitment.
Authors: Oakley, Robert H and Hudson, Christine C and Sjaastad, Michael D and Loomis, Carson R
Journal: Methods in enzymology (2006): 50-63
Development and validation of algorithms for measuring G-protein coupled receptor activation in cells using the LSC-based imaging cytometer platform.
Authors: Ozawa, Kazuo and Hudson, Christine C and Wille, Kirsten R and Karaki, Sachiko and Oakley, Robert H
Journal: Cytometry. Part A : the journal of the International Society for Analytical Cytology (2005): 69-76
Quantitative cell-based high-content screening for vasopressin receptor agonists using transfluor technology.
Authors: Ghosh, Richik N and DeBiasio, Richard and Hudson, Christine C and Ramer, Everett R and Cowan, Conrad L and Oakley, Robert H
Journal: Journal of biomolecular screening (2005): 476-84
The cellular distribution of fluorescently labeled arrestins provides a robust, sensitive, and universal assay for screening G protein-coupled receptors.
Authors: Oakley, Robert H and Hudson, Christine C and Cruickshank, Rachael D and Meyers, Diane M and Payne, Richard E and Rhem, Shay M and Loomis, Carson R
Journal: Assay and drug development technologies (2002): 21-30
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验GPCR是如何和它的信号分子进行时序性相互作用的，进而了解GPCR关于信号分子调控这一重要的生物学问题。只有了解清楚GPCR的整个结构、调控机制等相关信息后，才能够充分利用这个系统的信息来帮助设计药物。A site of vulnerability on the influenza virus hemagglutinin head domain trimer interface美国NIH国家过敏和传染病研究所（NIAID）资助的一项最新研究表明，流感病毒蛋白质的不断变化的“头部”具有意想不到的致命弱点
Transformation of E. coli by Electroporation
autoclaved bottles!). 4. Wash the cell pellet by resuspending in 250 ml of sterile ice-cold WB (10% redistilled glycerol, 90% distilled water, v/v). Centrifuge the cell suspension at 5,000 RPM for 15 min and carefully pour off the supernate as soon
. If the solution needs to be at a specific pH, check the pH meter with fresh buffer solutions and follow instructions for using a pH meter. Autoclave, if possible, at 121EC for 20 min. Some solutions cannot be autoclaved, for example, SDS
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
