活性氧 Cell Meter 荧光法胞内总ROS检测试剂盒

活性氧（ROS）是氧正常代谢的天然副产物，在细胞信号传导中起重要作用。 ROS的积累会严重破坏细胞结构。氧化应激在心血管疾病，糖尿病，骨质疏松症，中风，炎性疾病，许多神经退行性疾病和癌症中的作用已得到公认。 ROS测量将有助于确定氧化应激如何调节各种细胞内途径。 Cell Meter 荧光细胞内总ROS活性测定试剂盒使用我们专有的ROS Brite 570指示剂来定量活细胞中的ROS。与ROS反应后，可渗透细胞且无荧光的ROS Brite 570表现出很强的荧光信号。 ROS Brite 570指示剂位于细胞质中。 ROS Brite 570指示剂的荧光信号可以通过荧光显微镜，高通量筛选，荧光酶标仪或流式细胞仪进行检测。 Cell Meter 荧光细胞内总ROS活性测定试剂盒提供了一种灵敏的一步荧光测定法，可在孵育1小时内检测活细胞中的细胞内ROS（尤其是超氧化物和羟基自由基）。可以使用荧光酶标仪或带有TRITC滤光片的荧光显微镜以方便的96孔或384孔板形式进行检测。，为您提供优质的Cell Meter 荧光法胞内总ROS检测试剂盒。

活性氧（ROS）篇：包含总ROS和多种活性氧离子检测试剂大全

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流式细胞仪
Ex:	488 nm or  532 nm
Em：	575/26 nm
通道:	PE 通道

 

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荧光显微镜
Ex:	TRITC 滤波片组
Em：	TRITC 滤波片组
推荐孔板:	黑色透明底板

 

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荧光酶标仪
Ex:	540 nm
Em：	570 nm
Cutoff：	550 nm
推荐孔板:	黑色透明底板
读取模式：	底读模式

样品实验方案

简要概述

（适用于荧光显微镜、荧光酶标仪）

1.在生长培养基中准备细胞

2.用测试化合物处理细胞以诱导ROS

3.添加ROS Brite 570工作溶液（对于96孔板为100 µL /孔，对于384孔板为25 µL /孔）

4.将细胞在37°C下染色30-60分钟

5.在Ex / Em = 540/570 nm（截止= 550 nm）或配备TRITC滤光片的荧光显微镜下检测荧光的增加（底部读取模式）

（流式细胞仪）

溶液配制

储备溶液配制

1. ROS Brite 570储备溶液（500X）：将40 µL DMSO（组分C）添加到ROS Brite 570（组分A）小瓶中，并充分混合以制成500X ROS Brite 570储备液，避光。 注意：20 µL 500X ROS Brite 570储备溶液足以用于1个板。 对于流式细胞仪，为方便起见，可以将5倍ROS Brite 570储备液稀释5倍至DMSO中的100倍。 为了存放，请将管子紧紧密封。

 

工作溶液配制

将20 µL的500X ROS Brite 570储备溶液添加到10 mL的测定缓冲液（组分B）中，并充分混合以制成ROS Brite 570工作溶液。 注意：此ROS Brite 570工作溶液在室温下至少可稳定2小时。

 

实验步骤

1.针对荧光显微镜和荧光酶标仪：

1.1在所需的缓冲液（例如PBS或HHBS）中，用10 µL 10X测试化合物（96孔板）或5 µL 5X测试化合物（384孔板）处理细胞。 对于对照孔（未处理的细胞），添加相应量的化合物缓冲液。

1.2要诱导ROS，请在室温下或在5％CO₂、37°C的培养箱中孵育细胞板（例如：用100 µM氢过氧化叔丁基（TBHP）处理Hela细胞30分钟）。

1.3将100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的ROS Brite 570工作溶液添加到细胞板中。

1.4将细胞在5％CO₂、37°C的培养箱中孵育30分钟至60分钟。

1.5使用荧光酶标仪（Ext / Em = 540/570 nm（截止= 550nm））检测荧光的增加，或使用带有TRITC滤光片组的荧光显微镜检测细胞。

2.针对流式细胞仪：

2.1准备从5×10⁵到1×10⁶细胞/ mL的密度的细胞。 注意：应根据个体情况评估每种细胞系，以确定诱导凋亡的细胞密度。

2.2在所需的缓冲液（例如PBS或HHBS）中用测试化合物处理细胞。 对于对照孔（未处理的细胞），添加相应量的化合物缓冲液。

2.3要诱导ROS，请在室温下或在5％CO₂、37°C的培养箱中孵育细胞板至少30分钟（如对于用100 µM氢过氧化叔丁基（TBHP）处理的Hela细胞，则需30分钟） ）。

2.4向细胞培养基中加入1 µL / mL的500X ROS Brite 570储备液细胞或5 µL / mL的100X ROS Brite 570储备液细胞。

注：1µL/mL 表示每毫升细胞培养基中添加的ROS Brite 570储备液体积为1微升。这个浓度是相对于细胞培养基的总体积而言的，因此也可以说是在每升细胞培养基中添加1毫升ROS Brite 570储备液。这种浓度通常用于细胞实验中，以使得实验物质与细胞有良好的相互作用，同时不会对细胞造成太大的毒性影响。该浓度仅为初学者进行指导，请根据自己的实际情况，调整浓度，优化自己的实验。

2.5将细胞在5％CO₂、37°C的培养箱中孵育30至60分钟。

2.6使用带有FL2通道的流式细胞仪检测荧光强度。

 

参考文献

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