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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名：
Cell Meter™ Caspase 3/7 Activity Apoptosis Assay Kit *Red Fluorescence*
- 库存：
50
- 供应商：
广州市左克生物科技发展有限公司
- 规格：
100Tests
| Ex (nm) | 532 | Em (nm) | 619 |
| 分子量 | - | 溶剂 | - |
| 存储条件 | - |
Cell Meter Caspase 3/7活性细胞凋亡检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测细胞凋亡的试剂盒，我们的Cell Meter 检测试剂盒是一套用于监测细胞生存力的工具。有多种参数可用于监测细胞活力。该特定试剂盒旨在通过测量Caspase 3来监测细胞凋亡。由于caspase-3（CPP32 / apopain）对于细胞凋亡的启动很重要，因此caspase 3被公认为是细胞凋亡的可靠指标。半胱天冬酶3具有对肽序列Asp-Glu-Val-Asp（DEVD）的底物选择性。该试剂盒使用Z-DEVD-ProRed 作为caspase-3活性的荧光指示剂。半胱天冬酶3对ProRed DEVD封闭肽残基的切割产生强红色荧光的ProRed ，该荧光在〜620 nm处以荧光光谱法进行监测，激发波长约为530 nm。该试剂盒可提供所有必需成分，并具有优化的测定方案，该测定适用于高通量测定。该试剂盒以96孔板每孔使用100 uL试剂，可提供足够的试剂来执行100次测定。该试剂盒以384孔板每孔使用25 uL试剂，可提供足够的试剂来执行400次测定。，为您提供优质的Cell Meter Caspase 3/7活性细胞凋亡检测试剂盒。
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适用仪器
| 荧光酶标仪 | |
| Ex: | 540 nm |
| Em： | 620 nm |
| Cutoff： | 610 nm |
| 推荐孔板: | 黑色透明底板 |
| 读取模式: | 顶/底读模式 |
样本实验方案
简要概述
1.用测试化合物（100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板）制备细胞
2.加入等体积的Caspase 3/7工作溶液
3.在室温下孵育1小时
4.监测Ex / Em = 540/620 nm处的荧光强度（截止= 610 nm）
溶液配制
储备溶液配制
1.Z-DEVD-ProRed 储备溶液（200X）：将65 µL DMSO加到Z-DEVD-ProRed （组分A）的小瓶中，制成200X Z-DEVD-ProRed 储备液，避光储存。
工作溶液配制
将50μL的200X Z-DEVD-ProRed 储备溶液添加到10 mL的测定缓冲液（组分B）中，并充分混合以制成Caspase 3/7底物工作溶液。 注意：分装并在-20℃下存储未使用的Z-DEVD-ProRed 储备溶液（来自步骤2.2）和测定缓冲液（组分B）。 避免重复冻结/解冻循环。有关细胞样品制备的指南，请点击查看。
操作步骤
1.准备细胞：
1.1 对于贴壁细胞：将细胞在生长培养基中以20,000个细胞/孔/ 90 uL接种96孔，或以5,000个细胞/孔/ 20 uL接种384孔，过夜培养。
1.2 对于非贴壁细胞：从培养基中离心细胞，然后将细胞沉淀以80,000至200,000个细胞/孔/ 90 uL悬浮在培养基中，用于96孔；或20,000至50,000个细胞/孔/ 20 uL用于384个细胞。 实验前，将板以800 rpm的速度离心2分钟。 注意：应单独评估每种细胞系，以确定诱导凋亡的佳细胞密度。
2.通过向PBS或所需的缓冲液中加入10 µL /孔的10X测试化合物（96孔板）或5 µL /孔的5X测试化合物（384孔板）来处理细胞。对于空白孔（不含细胞的培养基），添加相同量的化合物缓冲液。
3.将细胞板在37°C，5％CO2的培养箱中孵育（对于用星形孢菌素处理的Jurkat细胞为3-4小时）以诱导凋亡。
4.加入Caspase 3/7底物工作溶液（100 µL /孔/ 96孔板或25 µL /孔/ 384孔板。）
5.在避光的条件下，在室温下孵育平板至少1小时。注意：如果需要，在室温下添加Caspase 3/7工作溶液之前10分钟，向选定的样品中添加1 µL 1 mM Ac-DEVD-CHO caspase 3/7抑制剂，以确认对caspase 3 / 7-like的抑制活动。
6.使用荧光酶标仪（Ex / Em = 540/620 nm（截止= 610 nm））监控荧光强度。注意：有时，底部读取可提供更好的信噪比。如果使用底部读取模式，则以800 rpm的速度离心细胞板（特别是非粘附细胞）2分钟（制动）。
图示
图1. Jurkat细胞中Caspase 3/7活性的检测。 当天，将Jurkat细胞以200,000个细胞/ 90 µL /孔的密度接种在Costar黑色96孔板中。 用或不用1 µM星形孢菌素处理细胞5小时。 加入半胱天冬酶3/7工作溶液（100 µL /孔）并在室温下孵育1小时。 使用FlexStation荧光酶标仪（Molecular Devices）在Ex / Em = 540/620 nm（截止= 610 nm）下测量荧光强度。 |
参考文献
Hypertonicity primes malignant melanoma cells for apoptosis
Authors: Diana Nicoleta Calance, Charlotte Steixner, Stefanie Gross, Beatrice Schuler-Thurner, Gertrud Knoll, Martin Ehrenschwender
Journal: Apoptosis (2018): 1--9
Angiopoietins Modulate Survival, Migration, and the Components of the Ang-Tie2 Pathway of Chronic Lymphocytic Leukaemia (CLL) Cells In Vitro
Authors: Luis Mario Aguirre Palma, Hanna Flamme, Iris Gerke, Karl-Anton Kreuzer
Journal: Cancer Microenvironment (2016): 13--26
Hypoxia regulates TRAIL sensitivity of colorectal cancer cells through mitochondrial autophagy.
Authors: Gertrud Knoll, Sebastian Bittner, Maria Kurz, Jonathan Jantsch, Martin Ehrenschwender
Journal: Oncotarget (2016)
microRNA-186 inhibits cell proliferation and induces apoptosis in human esophageal squamous cell carcinoma by targeting SKP2
Authors: Wei He, Jianfang Feng, Yan Zhang, Yuanyuan Wang, Wenqiao Zang, Guoqiang Zhao
Journal: Laboratory Investigation (2016): 317--324
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Journal: Colloids and Surfaces B: Biointerfaces (2016): 440--452
Role of delta-like ligand-4 in chemoresistance against docetaxel in MCF-7 cells
Authors: Q Wang, Y Shi, HJ Butler, J Xue, G Wang, P Duan, H Zheng
Journal: Human & Experimental Toxicology (2016): 0960327116650006
Glucose promotes cell proliferation, glucose uptake and invasion in endometrial cancer cells via AMPK/mTOR/S6 and MAPK signaling
Authors: Jianjun Han, Lu Zhang, Hui Guo, Weiya Z Wysham, Dario R Roque, Adam K Willson, Xiugui Sheng, Chunxiao Zhou, Victoria L Bae-Jump
Journal: Gynecologic oncology (2015): 668--675
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Authors: Andrea Allgäuer, Elisabeth Schreiner, Fulvia Ferrazzi, Arif B Ekici, Armin Gerbitz, Andreas Mackensen, Simon Völkl
Journal: The Journal of Immunology (2015): 3139--3148
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Journal: Biochimie (2015): 85--93
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文献和实验-3 抑制剂，重组的Caspase-3，检测缓冲液，样本缓冲液。整个实验过程需3 小时。 15、Caspase-3 Activity Detection Kit （红色荧光） 目录号：QIA93 包装：100T/Kit 本试剂盒提供了一种可用于各种来源的活细胞内Caspase-3 的快速而灵敏的检测手段，整个实验过程仅需1.5 小时。试剂盒中所使用的荧光标记物为磺基罗丹明标记的DEVD-FMK ，这种可进入细胞的无毒性的抑制剂不可逆地与凋亡细胞中的已经活化的Caspase-3 结合
细胞术已经成为凋亡分析的重要检测手段。PharMingen公司提供了许多从多种角度研究凋亡的试剂系统，包括小鼠、大鼠和人类蛋白抗体：Fas和Fas配体、TRAIL和DR3/DR4、Bcl-2家族、Caspase酶家族及其它信号蛋白；再有，提供了多种流式细胞仪检测试剂盒，包括：Caspase-3 Assay Kit、APO-BRDU和APO-DIRECT Kit、Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit；另外，还提供了mRNA分析试剂——RiboQuant Rnase
细胞亚群之间的免疫突触 3. 使用非干扰试剂测量肿瘤细胞的死亡和对肿瘤细胞增殖的抑制作用 图3 利用Incucyte®免疫细胞杀伤试验查看免疫细胞/肿瘤细胞相互作用。(1)细胞毒性T细胞和红色荧光标记的肿瘤细胞之间的相互接触。T细胞分裂。(2)肿瘤细胞受到细胞毒性T细胞的攻击：“死亡之吻”。(3) 追踪肿瘤细胞凋亡（caspase 3/7绿色荧光标记）、核固缩和细胞死亡。(4)肿瘤细胞分裂。 图4 使用Incucyte® FabFluor-488试剂，在共培养体系中查看
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