钙离子荧光探针Fluo-5N,AM

关键参数

仪器：荧光酶标仪

Ex:490

Em:525

Cutoff:515

推荐孔板：纯黑色

 

仪器：荧光显微镜

通道：FITC

推荐孔板：黑壁透明底

 

仪器：流式细胞仪

通道：FITC

 

产品介绍

钙离子荧光探针Fluo-5N,AM是美国AAT Bioquest生产的钙离子荧光探针，Fluo-5N是Fluo-4的类似物，具有较低的钙结合亲和力（Kd = ~90 uM），使其适用于检测1μM至1 mM范围内的细胞内钙水平，这将使Fluo-4的反应饱和。。 通过将溶解的指示剂直接加入含有培养细胞的培养皿中，可以将Fluo-5N AM酯直接加载到活细胞中。 它与氩离子激光源在488 nm激发相容，使Fluo-5N可用于共聚焦显微镜，流式细胞仪和微孔板筛选应用。 它的激发和发射波长分别为494和516 nm。 钙结合后，其荧光强度增加> 100倍。，为您提供优质的钙离子荧光探针。

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钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

操作步骤

1.准备HHBS缓冲液，10％Pluronic®F-127溶液和25 mM Probenecid溶液。

2.在高质量无水DMSO中制备2 mM至5 mM Fluo-5N，AM *细胞渗透物*储备溶液。
2.1使用的Fluo-5N，AM *细胞渗透物*的量：1mg
2.2所需浓度：2 mM
2.3在合适的容器中，将1mg Fluo-5N，AM *细胞渗透物*与443.29μL无水DMSO混合。
 

3.使用10μMFluo-5N，AM *细胞渗透物* 4在HHBS中制备2X工作溶液，0.08％Pluronic®F-127和2 mM丙磺舒。
3.1终井内浓度的Fluo-5N，AM *细胞渗透物*：5μM
3.2Pluronic®F-127的终井内浓度：0.04％
3.3终孔内浓度的丙磺舒：1mM
3.4在合适的容器中混合16μLFluo-5N，AM *细胞渗透物*，25.6μL10％Pluronic®F-127和256μL25mM丙磺舒。接下来，添加HHBS或您选择的缓冲液，直到体积为3.2 mL。
注意：对于大多数细胞系，我们建议终浓度为Fluo-5N，AM *细胞渗透物*为4至5μM。
注意：推荐的Pluronic F-127井浓度终为0.02％至0.04％。
注意：推荐的终浓度为1至2.5 mM的Probenecid。
 

4.将100μL染料工作溶液加入已经含有100μL培养基的所需孔中。
4.1该步骤将染料工作溶液从2X稀释至1X，并将每种组分的终浓度调节至：5μMFluo-5N，AM *细胞渗透物*，0.04％Pluronic F-127,1mM丙磺舒。

 

5.孵育染料
5.1将染料加载板在细胞培养箱中孵育20-120分钟。
5.2将染料加载板在室温下孵育30分钟。
 

6.用1.0 mM Probenecid准备HHBS缓冲液（或您选择的缓冲液）。
6.1在合适的容器中加入160μL的25mM丙磺舒。 接下来，添加HHBS或您选择的缓冲液，直到体积为4 mL。
 

7.用HHBS缓冲液或您选择的缓冲液替换染料工作溶液，使用1.0 mM Probenecid。
7.1首先，从所需孔中除去200μL染料工作溶液和培养基。
7.2在相同的孔中加入200μL含有1.0mM丙磺舒的HHBS（或您选择的缓冲液）。
 

8.运行实验
8.1为您的样品添加所需的处理。
8.2以Ex / Em = 494/516 nm运行实验

 

参考文献

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钙离子荧光探针Cal-520N, AM	Cat#21146