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- Cmbio
- 进口/上海
- CM-1193S
- 2025年12月23日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名：
rRTEC大鼠肾小管上皮细胞
- 库存：
100
- 供应商：
上海淳麦生物
- 细胞类型：
rRTEC大鼠肾小管上皮细胞
- 物种来源：
肾小管；上皮细胞
- 运输方式：
常温/干冰
- 年限：
10
- 生长状态：
贴壁/悬浮
- 规格：
T25/冷冻管
rRTEC大鼠肾小管上皮细胞培养前的准备
在您带上手套开始细胞培养之前,先检查一下移液管和瓶子的数量是否充足,以免在开始实验后再次出入操作台，这样可以降低细胞污染的风险。细胞培养基也应先预热,选择只预热部分培养基而非整瓶加热,不但可以节约实验时间,而且可以避免因反复加热培养基而造成的蛋白质降解。结束操作后,别忘了培养基对光敏感,应尽可能避光保存。
细胞培养的定期检查
定期检查培养细胞的形态，即形状和外观，对于细胞培养实验取得成功至关重要。除确认细胞的健康状态外，每次操作细胞时通过肉眼和显微镜检查细胞还可早期发现污染征象，避免污染扩散至实验室其他细胞。
培养瓶/皿等物品的无菌操作
无菌培养瓶、试剂瓶、培养皿等物品使用时方可揭开盖子，不得将其开放暴露于环境中，操作完成后尽快盖上盖子，取下盖子时应将盖子开口朝下放在工作台面上。
rRTEC大鼠肾小管上皮细胞培养中可能的污染物
细胞培养污染物主要分为两类：化学污染物,如培养基、血清和水中的杂质、内毒素、增塑剂和去污剂。生物污染物，如细菌、霉菌、酵母、病毒、支原体以及其他细胞系的交叉污染。可通过充分了解污染源以及采用良好的无菌技术，降低污染发生的频率和严重程度。
细胞换液注意事项
为细胞换液时，要沿着培养瓶的一侧轻轻地加入，而不是直接加到细胞中，以免损伤细胞，当培养的细胞株较为脆弱时尤其需要注意。使用无菌玻璃吸管或一次性塑料吸管和移液器操作液体时，每支吸管只能使用一次，以免交叉污染。
细胞传代的时间把握
当细胞呈指数增殖，贴壁培养的细胞已占据所有可用基质、没有扩增空间，或悬浮培养的细胞已超过培养基质所支撑的能力，无法进一步生长时，细胞增殖速度将大大降低甚至完全停止。为了将细胞密度维持在最佳水平，以便细胞继续生长，并且刺激进一步增殖，必须对细胞进行传代。
细胞培养中使用抗生素的注意事项
细胞培养时不应长期使用抗生素，因为连续使用抗生素会促进抗生素耐药性细胞株的产生，导致轻度污染持续存在。抗生素只能作为对付污染的最后手段短期使用，并尽快撤除。如果长期使用抗生素，则应同时进行无抗生素培养，以便作为鉴别隐性感染的对照。
rRTEC大鼠肾小管上皮细胞培养方法：
1、您收到细胞后，请按照以下方法进行操作：
取出25cm2培养瓶，75%酒精擦拭培养瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态，然后换用新鲜完全培养液继续培养或进行传代。
2、细胞传代：
1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；
2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；
3）弃上清，沉淀细胞用12ml完全培养基重悬，然后按1:2比例进行分瓶传代，最后放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；
4）待细胞完全贴壁后，观察培养结果，之后进行换液培养或传代。
3、细胞冻存：
1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；
2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；
3）用适量的冻存液（FBS：DMSO=9 ：1）重悬细胞，并放置于冻存管中；
4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃过夜，24h后转入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。
4、细胞复苏：
1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；
2）将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中， 1000rpm离心5min；
3）弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种25cm2培养瓶，于37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；
4）第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。
相关细胞的形态供参考：
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文献和实验本人把大鼠原代肾小管上皮细胞的取材、培养方法进行了总 结，请分享！ 取材：1.肾小管节段的分离(机械网筛滤过法)： ①取 Wistar 大鼠断颈法处死，立即置入碘伏液中浸泡 5 分钟。 ②将大鼠转移入超净工作台，取腰部切口迅速取出肾脏，置于盛有生理盐水的培养皿中清洗并除去包膜和肾蒂组织。 ③取皮质置于80目筛网上，剪碎成1-2mm3大小组织块，网下放盛有少量生理盐水的培养皿。 ④用玻璃注射器内芯于80目网上充分研磨组织。 ⑤收集 80 目网下液体转移至 100
培养方法： 大鼠原代足细胞： 丁香园网友gaoxueyan99的观点为： 培养方法：过筛：100目，150目，200目，收集200目内为小球 1、选取100克左右大鼠，无菌取肾，去包膜，分离皮质，剪刀切成小块！ 2、100目上注射器芯研磨，DMEM培养液冲洗100目网筛多遍，DMEM冲洗200目内组织！ 3、离心管收集，1000转离心5分钟！ 4、完全培养基重悬沉淀，接种于培养瓶或皿！一只大鼠一皿或一瓶！ 5、5％CO2，37度培养箱最内测放置
水洗；④人孵育液，37C孵育2～4小时；⑤双蒸水洗2―3分钟；⑥入1％硫化铵液(新鲜配制)l一2分钟；⑦蒸馏水冲洗；⑧甘油明胶封固。3)结果与评价：阳性反应部位呈棕褐色硫化铅颗粒。该酶为可溶性酶，以冷固定效果较好，一般溶酶体膜为不通透性膜，但经冰冻熔化或福尔马林固定处理后，孵育液内的作用底物则进入溶酶体而被酶作用。酸性磷酸酶铅法染色大鼠肾小管上皮细胞呈棕色为酸性磷酸酶肛拦反应4)注意事项：孵育液内铅离子浓度是反应的关键因素，必须新鲜配制，立即使用。因为当铅离子浓度过低时，产生的磷酸离子未能完全被结合
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
