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- 上海科梦达生物
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- K2705
- 2025年09月18日
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上海科梦达生物
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上海科梦达生物主营：动物血清血浆全血，各种浓度红细胞，ELISA试剂盒，生化试剂盒，PCR试剂盒，胎牛血清（Gibco/BI/Gemini/PAN等），细胞（细胞系，原代细胞），培养基，各类抗原，抗体，抗血清，感受态细胞，考马斯亮蓝蛋白快速染液等，液相检测， 气相检测 ，液质联用检测 ，常规生理生化测定，土壤检测，elisa检测服务（购买本公司ELISA试剂盒免费代测）
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文献和实验酶活性，此酶将缺口5’侧核苷酸依次切除。其结果是在缺口平移（nick tr－anslation）。根据这个原理，如果用高强度的放射性核苷酸（通常为α-32PdATP）置换先前存在的核苷酸，则可制备比活性高达108cpm（每分钟计数）/μg的32P标记DNA。用缺口平移法标记的DNA探针能满足大多数杂交要求。 2．DNA快速末端标记 大肠杆菌DNA聚合酶i 经枯草杆菌蛋白酶切割可得到两条多肽链，其中分子量为76kd的大片段称为Klenow片段。该酶具有完整聚合酶I的5’→3’聚合酶活性和3’→
1μg [α-32 P]dCTP或dATP(70μCi) 7μl E.coli DNA聚合酶 4单位 DAN酶 I 1μl 加水至终体积 50μl (2) 置于15℃水浴60分钟。 (3) 加入5μl EDTA终止反应。 (4) 反应液中加入醋酸铵,使终浓度为0.5mol/L, 加入两倍体积预冷无水乙醇沉淀回收DNA探针。 [注意] 1、3H，32P及35S标记的dNTP都可使用于探针标记，但通常使用[α-32 P]-dNTP。
酶促标记方法不同。通常，对于5’磷酸化的DNA探针，要先用碱性磷酸酶去掉磷酸基团，然后再用于PNK催化的5’末端标记，这样标记效率较高。 4．随机引物延伸 这是以单链DNA或RNA模板合成高比活性32P标记探针所选用的方法。原理是使长6～8nt的寡核苷酸片段与变性的DNA或RNA模板退火，在DNA聚合酶I或反转录酶的作用下，以每一个退火到模板上的寡核苷酸片段为引物引发DNA链的合成，在反应时将[α-32P]dNTP掺入合成链，即得到标记。变性处理后，新合成链（探针片段）与模板解离
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