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- 上海科梦达生物
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- K1196
- 2025年09月18日
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参考说明书
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上海科梦达生物
- 规格：
A液：10毫升 B液：90毫升C液：1毫升
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上海科梦达生物主营：动物血清血浆全血，各种浓度红细胞，ELISA试剂盒，生化试剂盒，PCR试剂盒，胎牛血清（Gibco/BI/Gemini/PAN等），细胞（细胞系，原代细胞），培养基，各类抗原，抗体，抗血清，感受态细胞，考马斯亮蓝蛋白快速染液等，液相检测， 气相检测 ，液质联用检测 ，常规生理生化测定，土壤检测，elisa检测服务（购买本公司ELISA试剂盒免费代测）
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文献和实验（1）DAB显色时间不是固定的，主要由显微镜下控制显色时间，到出现浅棕色本底时即可冲洗； （2）DAB显色时间很短（如几秒或几十秒）就出现很深的棕褐色，这很可能说明你的抗体浓度过高或抗体孵育时间过长，需要下调抗体浓度或缩短你的抗 体孵育时间； （3）此外，若很短时间就出现背景很深，还有可能你前面的封闭非特异性蛋白不全，需要延长封闭时间； （4）DAB显色时间很长（如超过十几分钟）才出现
。 2. 把握好细胞通透的时间。一般根据切片的厚薄，选择蛋白酶k的孵育时间，常用 10-30 min，几 μm 厚的切片用短时间;几十 μm厚的 切片用长时间，通过摸索达条件使实验过程做到既不脱片，也能够使后面的酶或抗体进入胞内。 3. 适当延长 TUNEL 反应液的时间。一般是37ºC孵育 1 h，也可以根据细胞的凋亡损伤程度，选择更长的时间，可长至 2 h，但要结合实验最终的背景着色来确定。 4. DAB 显色条件的选择。如果是用DAB显色，一般 DAB 反应不超过10 min，可结合显微镜观察控制背景
静置，或 37℃ 1 小时；12）II抗中可加入 0.05% 的 tween-20。13）PBS 洗 3 次各 5 分钟；14）DAB 显色 5～10 分钟，在显微镜下掌握染色程度；15）PBS或自来水冲洗 10 分钟；16）苏木精复染 2 分钟，盐酸酒精分化；17）自来水冲洗 10～15 分钟；18）脱水、透明、封片、镜检。 二、SABC法 1）脱蜡、水化。2）PBS 洗两次各 5 分钟。3）用蒸馏水或PBS配置新鲜的3%H2O2，室温封闭5～10分钟，蒸馏水洗3次。4）抗原修复。5）PBS洗5分钟
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