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上海科梦达生物
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上海科梦达生物主营:动物血清血浆全血,各种浓度红细胞,ELISA试剂盒,生化试剂盒,PCR试剂盒,胎牛血清(Gibco/BI/Gemini/PAN等),细胞(细胞系,原代细胞),培养基,各类抗原,抗体,抗血清,感受态细胞,考马斯亮蓝蛋白快速染液等,液相检测, 气相检测 ,液质联用检测 ,常规生理生化测定,土壤检测,elisa检测服务(购买本公司ELISA试剂盒免费代测)
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文献和实验2)。 图2 使用BLOCK-iT™ Complete Dicer RNAi Kit得到>80%的靶定基因阻断 经Dicer酶切的,来源于β-半乳糖苷酶或者荧光素酶的dsRNA产生siRNA(d-siRNA)库,用来确定d-siRNA特异阻断基因活性的效果。GripTite™ 293 MSR 细胞共转染pcDNA™1.2/V5-GW/lacZ阳性对照质粒和pcDNA™5/FRT/luc,分别独自表达β-gal或者荧光素酶报告子,或者50ng luc 或者lacZ d-siRNA。对于每一种报告子
0.2% 时,可使包被在固相上的抗原或抗体解吸附而减低试验的灵敏度。 (2) 流水冲洗式:流水冲洗法最初用于小珠载体的洗涤,洗涤液仅为蒸馏水甚至可用自来水。洗涤时附接一特殊装置,使小珠在流水冲击下不断地滚动淋洗,持续冲洗 2 分钟后,吸干液体,再用蒸馏水浸泡 2 分钟,吸干即可。浸泡式犹如盆浴,流水冲洗式则好比淋浴,其洗涤效果更为彻底,且也简便、快速。已有实验表明,流水冲洗式同样也适用于微量滴定板的洗涤。洗涤时设法加大水流量或加大水压,让水流冲击板孔表面,洗涤效果更佳。 6. 显色和比色
在哺乳动物细胞中进行RNA干扰:设计,实验和分析siRNA效应
。 图一:用化学合成法和体外转录法制备的 siRNAs的活性比较。用两种方法分别制备同一siRNA序列并按照不同浓度分别转染Hela细胞。收集纯化各样品的GAPDH mRNA并用Northern分析。GAPDH信号用cyclophilin探针平衡化,用磷感屏定量。 用siRNA在不同的哺乳动物细胞中诱导基因沉默。 siRNA在哺乳动物细胞中诱导基因沉默需要一系列的内源蛋白效应分子,为了研究不同的哺乳动物细胞对siRNA的敏感性是否有特定的规律,实验选择8种细胞株:HeLa S3
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