血红细胞直接溶解液

MTT 的操作方法（三）

，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪 OD490nm 处测量各孔的吸光值。另一种方法，用三联溶解液（见上面 MTT 甲瓒溶解液）1)MTT 加入培养 4 h 后，结晶可充分形成。这种方法细胞上清可以不用去掉，直接在每孔加入 100ul 溶解液。（该溶解液因含有 SDS，在低温保存的时候易产生结晶，因此在用之前必须提前几小时拿至室温，将 SDS 结晶全部溶解后再使用。）2) 放入培养箱中继续孵育 4~6 小时，镜下观察，待结晶全部溶解后 570nm 测吸光度。通常 37°C 孵育 4 小时左右，紫色

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的分子量（垂直板型电泳）（图）

的分子量测定较好，对糖蛋白，胶原蛋白等分子量测定差异较大。 （8）对样品的要求：应采纳低离子强度的样品。如样品中离子强度高，则应透析或经离子交换除盐。加样时，应保持凹形加样槽胶面平直。加样量以10～15μl为宜，如样品系较稀的液体状，为保证区带清晰，加样量可增加，同时应将样品溶解液浓度提高二倍或更高。 （9）由于凝胶中含SDS，直接制备干板会产生龟裂现象。如需制干板，则用25%异丙醇内含7%乙酸浸泡，并经常换液，直到SDS脱尽（约需2～3天），才可制备干板。为方便起见，常采用照像法，保存照片。

MTT 的操作方法（二）

基亚砜 DMSO，可以直接溶解，无需配制，使用方便，溶解速度快，但对人体毒性较大，且需去除原培养液，在去除培养液的过程中，可能会把结晶去掉，导致结果不稳定。2.2 三联溶解液：SDS10 g，异丁醇 5 ml，10M HCl 0.1 ml 用双蒸水溶解配成 100 ml 溶液（文献方法：周建军等，评价抗癌物质活性的改良 MTT 方法，中国医药工业杂志，1993，24（10）：455-457），该溶解液不需去除原培养基，但溶解较慢。（个人觉得其溶解的能力不如 DMSO 强）该溶解液因含有 SDS，在低温