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- 赛默飞（Thermo Fisher）
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- 2025年07月09日
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文献和实验【求助】(Western Blot) 检测不到P-erk却能检测到erk
biozk 一抗都是cst的，二抗对照也没有问题，细胞裂解液里有磷酸化酶抑制剂，请问可能是哪里的问题？谢谢。 msniu 你说的是正常现象啊。erk细胞内本来就有很多，可以检测到，而p-erk是激活后才有的，有的细胞p-erk是激活的，有的细胞p-erk不是激活的，需要刺激激活。不激活的检测不到。你要是怕实验操作有问题，可以做个用EGF激活的做阳性对照。还有一种情况是，你细胞的erk磷酸化水平低，曝光时间短了，信号没显
ahuchxq 因为最近作磷酸化的ERK的western ,我用的是Hela 229 细胞，但是比较郁闷的是，这个细胞为什么阳性对照组和没有任何处理的一组都有磷酸化的ERK？是我细胞坏了还是本来这个细胞就是这样？我用Hela 细胞试了下，对照组也有一点，但是明显比阳性对照组弱，293细胞也是。但是就是229细胞没有任何区别，我很郁闷，试了好几次都是这样，因为前期大量实验都是在229细胞上做的，所以不能选其他细胞了。。 请求有经验的大哥大姐指教。。。。不胜
dazuo2005 不知有做erk通路的老大没有，本人想做脊髓背角p－erk免疫组化和western blot p－erk1/2，能否给予指点，现在看了写文献，感觉无从下手，很多文献的方法都不同，不知要按照哪个来做。谢谢先了。 zhengfeifei 有什么难的地方？ dazuo2005 首先，P-ERK免疫组化取材问题，我准备做sd大鼠脊髓，是否作灌注，固定然后取材？此外是要石蜡
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