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文献和实验核定位信号的受体蛋白, 存在于胞质溶胶中, 可与核定位信号结合, 帮助核蛋白进入细胞核, 这种受体称为输入蛋白。它们作为一种穿梭受体(shuttling receptor)在细胞质内与核蛋白的核定位信号结合, 然后一起穿过核, 在核内与亲核蛋白分离后再返回到细胞质中。输入蛋白有α和β两种亚基。
干货 | CUT and Tag 核心酶 Hyperactive PA/PG-Tn5 Transposase 大解密
。 图 9. 不同细胞投入进行 CUT&Tag 实验得到的目的 reads 与 E.coli 残留结果展示[2] 诺唯赞生物针对 Tn5 酶非特异性核酸残留问题进行攻克(见图 11),优化酶生产工艺,大大降低了低起始量细胞建库中非特异核酸占比。 图 11. pA-Tn5 核酸残留与公司核酸残留比较 核酸残留检测方案:实验人员使用 PA-Tn5 裸酶进行 PK 消化,富集并回收核酸。设计针对细菌 23S 通用 qPCR 引物,对回收的核酸进行 qPCR 检测,计算 E.coli 核酸残留
经济地检测出目的蛋白。而事实上PA TAG/NZ-1可以用于免疫印迹、流式细胞仪或免疫细胞化学检测法(Immunocytochemistry : ICC)1,10)。由于PA TAG/NZ-1有很高的亲和性和特异性,可以迅速地检测出目的蛋白。特别是在使用免疫印迹时这个更加明显,比FLAG Tag更容易确认目的蛋白的条带。而且对一次抗体(NZ-1)培养5分钟就可以确认到蛋白质条带(图4)。具体的纯化、免疫印迹的方法请参考文献11。图4.使用PA TAG/NZ-1法进行免疫印迹本实验使用表达C末端串联
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