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- 赛默飞（Thermo Fisher）
- OSG00045W-100UL
- 2025年07月13日
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文献和实验Small Scale GST-Tag Purification Under Nature Conditions
Small Scale GST-Tag Purification Under Nature Conditions According to AMERSHAM-BIOSCIENCES-GST fusion protein Handbook (pdf) Aliquot of Cell Pellet after Induction The idea is to aliquot cells after induction
先介绍一下His Tag，为5-15 His 串在一起的小肽， 在表达纯化中用的较为普遍的一种Tag, 从本质上说它是一种亲和性Tag，但也个案证明其也能做一些兼职工作：增加蛋白可溶性，提高蛋白稳定性。但它的本质工作是与IMAC亲和，使纯化过程变的更加程序化，更具可控性。 相对与其他亲和Tag,如 GST, Flag, Strep, 它的特点可谓鲜明： 一，小，浓缩的都是精华，6个His 放在一起约2.5KD大小。His 的等电点为7.6，在常用的纯化缓冲体系（pH 8.0）中
with 1/2 volume of 50% GST beads at 4C rocking on the Nutator for 30-60 minutes. 50 ml conical Falcon tubes work well. Pour into a BioRad Column and drain lysate. Save 100 ul of depleted lysate. Load 2.5 ul for SDS-PAGE. Wash beads with 3 column volumes
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