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- 赛默飞（Thermo Fisher）
- OSA00073G-500UG
- 2025年07月12日
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100
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500 UG
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文献和实验出来的.像前面几位战友说的那样,可以考虑加大上样量 2. 是否WB的条件不好? 可以跑其他蛋白的WB看看,如果其他蛋白质都跑出来的很好的话, 可以考虑换个抗体试一试,,但是话说回来,cell signaling的p-AKT 很好的,我也用了好几年.ser473和T308都不错的. 3. 条带弱的话,可以用 can get sinal 去提高抗体的敏感度. BTW, 我自己跑p-akt的时候, 1抗是1:1500 2抗是 1:20000 good luck
碧峤 wrote: pAkt有两个位点，Ser473和Thr308，其中Ser473相对容易显色。如果显色失败，可能的原因:1 上样量过少，我们一般都是30μg；2 一抗孵育时间过短，我们一般24h~48h；3 一抗是否工作有待排除 我上样量上的15ug，一抗孵育大约18个小时，就是头天下午孵育上，第二天早上就洗膜了，之前做过一次pakt,一样的过程，出了一次，再以后就没出了。今天我们换了下不同组的同一组织，比较新，试下，不知道明天出不出
receptorr 我在做HaCaT细胞的磷酸化Akt(473)时，背景比较高，该怎么办？（即未处理组的Akt比较高） 请高手支招。 谢谢 magichunter 说得太粗略了。 receptorr 我做的细胞是HaCaT 看看加入药物后HaCaT的磷酸化Akt是否有增高， 所以希望没有加药的那一组HaCaT的磷酸化Akt水平低 但是实际做时，发现没有
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