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文献和实验的用量每次为0.5-1毫升。洗涤时离心条件和吸除上清的要求同上面的步骤C3。 5).完成最后一次洗涤后,去除上清,加入20-40微升1XSDS-PAGE电泳上样缓冲液Vortex重悬沉淀,瞬时高速离心把样品离心至管底。 6).100℃或沸水浴处理3-5分钟,取部分或全部样品可测定浓度或者用于SDS-PAGE电泳,暂时不用的样品可以-20℃保存。Western blot检测实验试剂:Phosphotyrosine抗体( Millipore, #05-321, 1:500);Goat Anti
E.coli启动子的核心区域,即-10和-35六核苷酸区和一15-19bp的间隔序列。但有人提出核心序列以外的元件也能刺激启动子的活性[52]。许多研究也已证明,核心启动子上游的序列能够在体内提高转录起始的效率[53,54,55]。Gourse等证明,位于E.coli rRNA启动子rrnB P1 -35区上游的DNA序列即UP元件,能够在体内和体外提高转录效率30倍[56]。UP元件是作为一个独立的启动子组件发挥作用的,因为将其融合到其他启动子如lacUV5中也能刺激转录[57,58]。UP元件
Determining In Vivo Phosphorylation Sites Using Mass Spectrometry
base (pH not adjusted) Phosphotyrosine P‐Tyr‐100 mouse antibody (mAb), Sepharose conjugated (Cell Signaling Technology, cat. no. 9419)
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