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文献和实验收集在AnchorChip,并进行作质谱分析,用自动化Mascot进行数据搜索。结果 大部分视网膜蛋白可以在Tris缓冲液(EB1)及进一步的含尿素及CHAPS(分别含量为70%和28%)的缓冲液(EB2)中溶解。只有很少视网膜蛋白可溶解在SDS缓冲液(EB4)中。在2-D电泳中分离出的蛋白质特性与在EB1及EB2中分离出的蛋白质特性相似。很少部分的蛋白质只能经EB2萃取后经2-D电泳分离到。在机器自动化蛋白质分析鉴定中,总的成功检出率为67.8%。特别是那些有较好MS谱图的蛋白分子有着更高的检出率(>90%)。已鉴定
染色液:称100mg考马斯亮蓝G250,溶于200ml蒸馏水中,慢慢加入7.5ml 70%的过氯酸,最后补足水到250ml,搅拌1小时,小孔滤纸过滤。SDS-PAGE凝胶的有效分离范围丙烯酰胺浓度(%) 15 12.5 10 7.5 5.0线性分离范围 15-435kDa 15-60kDa 18-75kDa 30-120 kDa 60-212 kDa器材电泳仪,电泳槽,水浴锅,摇床。样品
15-60kDa 18-75kDa 30-120 kDa 60-212 kDa 器材 电泳仪 ,电泳槽,水浴锅,摇床。 样品制备 将蛋白质样品与5X样品缓冲液(20μl+5μl)在一个eppendorf 管中混合。放入100℃加热5-10min,离心,取上清点样。 电泳 1. 将玻璃板、样品梳、Spacer用洗涤剂洗净,用ddH2O冲洗数次,再用乙醇擦拭,晾干; 2. 将两块洗净的玻璃板之间加入
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