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文献和实验收集在AnchorChip,并进行作质谱分析,用自动化Mascot进行数据搜索。结果 大部分视网膜蛋白可以在Tris缓冲液(EB1)及进一步的含尿素及CHAPS(分别含量为70%和28%)的缓冲液(EB2)中溶解。只有很少视网膜蛋白可溶解在SDS缓冲液(EB4)中。在2-D电泳中分离出的蛋白质特性与在EB1及EB2中分离出的蛋白质特性相似。很少部分的蛋白质只能经EB2萃取后经2-D电泳分离到。在机器自动化蛋白质分析鉴定中,总的成功检出率为67.8%。特别是那些有较好MS谱图的蛋白分子有着更高的检出率(>90%)。已鉴定
,然后进行混合孵育并检测等等。免疫沉淀的方法运用合理,可以玩出很多有意思的实验,回答很多问题。图 4【六】亲和纯化 - 质谱,affinity purification-mass spectrometry(AP-MS),刚才说了,如果你在实验之前已经对目标蛋白有推测的互作蛋白,那么你可以做 western-blot 对它进行检测。可是,如果你想找一些以前未被报道,你自己也无法猜测的新互作蛋白呢?这个时候,你可以把免疫共沉淀后得到的样品,送去做蛋白组学质谱的实验室,通过质谱对这个复合体中的所有成员进行
-2Ⅱ类基因 1.经典Ⅱ类基因 经典的H-2Ⅱ类基因是指编码Ⅱ类分子的I(immune)区基因,I区内主要含有I-A和I-E两个亚区。I-A亚区有5个基因:编码I-A分子重链的Aa和Ab基因,和编码I-A轻链的AB、A月2和AB3基因。I-E内有Ea、Eb和Eb2三个基因。I-A和I-E分子分别由I-E和I-A重链基因和轻链基因编码的重、轻链组成。Aa、Ab、Ea和Eb基因均具有高度多态性。 2.非经典Ⅱ类基因 H-2 1区内尚有Ms、Mpl、Mp2和Os、Op两组基因,分别编码I-M
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