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文献和实验P 选择素 ( P-Selectin) , 再与 HRP 标记的 P 选择素 ( P-Selectin) 抗体结合,形成抗体 - 抗原 - 酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 P 选择素 ( P-Selectin) 呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度( OD 值),通过标准曲线计算样品中人大鼠 P 选择素 ( P-Selectin) 浓度。
人P选择素(P-selectin)酶联免疫分析(ELISA)
,往包被单抗的微孔中依次加入 P 选择素( P-selectin ),再与 HRP 标记的 P 选择素( P-selectin ) 抗体结合,形成抗体 - 抗原 - 酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 P 选择素( P-selectin ) 呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度( OD 值),通过标准曲线计算样品中人 P 选择素( P-selectin )浓度。
图) 博士德经过不断的探索,开发了ABC-双抗体夹心ELISA法(原理和操作过程示意图如下)进一步提高了敏感性 ①:固相支持物 ②:特异性包被抗体 ③:样品 ④:生物素化抗体 ⑤:辣根过氧化物酶HRP-酶标链亲和素 ⑥:TMB显色液 ⑦:显色 在ELISA实验前的注意事项 1.仔细阅读说明书 2.确定试剂盒在有效期内 3.按说明书确定所有试剂齐全(数量、体积) 4.标本制备要规范,每份标本体积要按2-3个复孔以上的量制备(贮存),尽量分装做备份。短期内无法 实验者,注意低温
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