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文献和实验RNA s,产物末端结构类似Dicer 降解产物(9) ,通过改变RNA seIII 的酶切条件可以提高降解产物的平均长度,达到目前的21bp。这些21bp的降解产物能够有效介导在哺乳动物细胞和小鼠胚胎中特定基因的RNA i(10,11) 。另外,实验表明,RNase III 的完全降解产物(1215bp)同样可以诱导专一的基因沉默,效果与化学合成或者是酶法得到的siRNA s 相当。验证RNaseIII 的消化能力采用RNaseIII 分别消化体外转录制备的人源GAPDH ,La 和c-FOS(200
GAPDH ,La 和c-FOS(200 bp) 双链RNA ,从而验证RNaseIII 的消化能力,结果表明,1个单位的RnaseIII 在37度1小时可以将1mg 的双链RNA 降解为30bp以下,主要是12―15bp 的siRNA s 混合物。用其他基因的双链RNA ,同样证实RNaseIII 能够消化各种双链RNA 序列。另外用Cyclophillin, c-myc, Map Kinase 9, PKC-alpha, Raf-1, Nautilus, 和 h-ras 等基因的双链
—— co-IP 检测 Hsp90 与 Cdc37 结合情况1、实验材料SKBR3 细胞,PMSF(Amresco,cat:329-98-6),cocktail(上海晶莱生物),脱脂奶粉(cat:66196131T),β-actin(上海晶莱生物)。Anti-Hsp90(santa,cat:sc-69703)、Anti-Cdc37(santa,cat:sc-13129)、Protein A+G agrose(Beyotime),细胞刮,4 度离心机(eppendorf,centrifuge
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