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100
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50 UG
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文献和实验糖,建议进行 Pre-clear;如果使用磁珠,此步可忽略 抗 X 抗体的轻链(25 kD)和重链(50 kD) 更侧重于如何在实验上进行优化(见下文) *注意:总蛋白上样量过多也会造成 非特异性结合,建议上样量为 500 ug-1 mg。上样之前一定要先用 BCA 定个量!定个量!定个量! pre-clear:上样前先用裂解液过一遍柱子,减少基质本身对蛋白的吸附 Output:在某些 co-IP 实验中,实验人员会把IP后的上清分别进行诱饵蛋白 X 和靶蛋白 Y 的 WB 检测
—— co-IP 检测 Hsp90 与 Cdc37 结合情况1、实验材料SKBR3 细胞,PMSF(Amresco,cat:329-98-6),cocktail(上海晶莱生物),脱脂奶粉(cat:66196131T),β-actin(上海晶莱生物)。Anti-Hsp90(santa,cat:sc-69703)、Anti-Cdc37(santa,cat:sc-13129)、Protein A+G agrose(Beyotime),细胞刮,4 度离心机(eppendorf,centrifuge
mMNaF50mM0.5 ml of 0.5M1ml of 0.5MDTT1mM5l (μl) of 1mM10l (μl) of 1mMAprotinin3ug/ml15l (μl) of 1 ug/μl3l (μl) of 10 ug/μlPepstatin2 ug/ml10l (μl) of 1 ug/μl20l (μl) of 1 ug/μlLeupeptin1 ug/ml5l (μl) of 1 ug/μl1l (μl) of 10 ug/μlOkadaic 1:500PMSF 35l70lH
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