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- 赛默飞（Thermo Fisher）
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- 2025年06月24日
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10 BLOT BIOSOURCE (TM)
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文献和实验运用Cell Based Elisa检测信号通路蛋白和磷酸化蛋白
and stimulated with 0, 0.1, 1 and 10 µg/ml anisomycin for 15 minutes (Lanes 1–4). A Western blot was performed with 8 mg of extracts using Phospho-p38 antibody (A) and Total-p38 antibody (B). Cell Based Elisa assays were performed directly in the 96-well plates
探针、RNA探针和寡核苷酸探针。对探针的标记方法又可以分为放射性标记和非放射性标记。这里主要介绍非放射性地高辛标记探针的杂交方法。杂交时各种探针的用量：DNA探针，5－25ng/ml；RNA探针，100ng/ml；寡核苷酸探针，0.1－10pmol/ml。双链DNA探针提前100℃变性10min后迅速冰浴，单链探针无需变性。将处理后的探针加入杂交液温浴至杂交温度。杂交温度的选择根据杂交液的不同而不同； 注意：应用寡核苷酸探针时，杂交温度的选择。Tm＝4�(G C) 2�(A T),杂交温度比Tm低约
检测系统，所以我们需要去除组织中内源性过氧化物酶的活性。只需在 3% H2O2 中浸泡 10 min 即可。此时的切片，便形似一张湿转后的 western blot 膜——方方的载体上分布着我们的蛋白。为了减少二抗与组织的非特异结合，我们需使用二抗来源的血清进行封闭。由于 CST 的绝大多数一抗为鼠抗（mouse）和兔抗（rabbit），对应的二抗来源于羊（goat），所以我们使用 5% 正常羊血清（溶剂为 TBST），将其滴加到组织上，室温封闭 1 h 即可。我们也可以使用 CST 新推出的不含
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