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文献和实验大家给看看,问题出在哪里?谢谢各位!!! 附: 枯草芽孢杆菌电转化方案 1 感受态细胞的制备 1.1 从新鲜培养的平板上接种一单菌落至3 ml B2液体培养基中,试管(17×100 mm)。 1.2 250 rpm,37℃培养过夜(16 h)。 1.3 接种1.5 ml过夜培养的种子至150 ml(装于1L的三角瓶中)新鲜的B2培养基中,200 rpm,37℃培养,至菌数达到~1×108 cells/ml。 1.4 将菌液冰水浴15 min,然后转移至250 ml的离心杯中,12
alkaline lysis purification: 7a. Precipitate the DNA by adding 1 ml of 95% ethanol, and resuspend the dried DNA pellet in 100-200 ul 10:0.1 TE buffer. Electrophorese an aliquot of the DNA sample on a 0.7% agarose gel to crudely determine
染色体步移是一种常用的克隆已知基因旁侧序列的技术。基因的表达调控已成为分子生物学研究热点之一,启动子是基因表达调控的重要顺式元件,启动子的克隆对于研究基因表达调控,构建基因工程载体,表达目的蛋白有着重要的意义。启动子克隆的方法很多,常见的扩增启动子或已知序列末端旁侧的核苷酸序列的方法有两种:方法一 酶切加接头1 大量提取基因组 DNA(1)取样品 100 mg,置于 1.5 mL EP 管中,加入 500 uL 裂解液(56 °C),用研磨棒充分匀浆。(2)加入 350 uL 苯酚(pH
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