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文献和实验该蛋白总的表达量(包括磷酸化和未磷酸化的该蛋白),甚至还可跑另一个gel,压内标。但是本人不建议如此做,因为这样比较时误差还是较大的。因此,比较公认的,本人也建议如此的方法,即:将原先结合上的磷酸化抗体及二抗洗去(strip),strip solution如下: 100mM 2-mercaptoethanol (stock 14.335M, 取697.6ul) 2% SDS (stock 10%, 取20ml) 62.5mM Tris (pH6.7)(stock
大家给看看,问题出在哪里?谢谢各位!!! 附: 枯草芽孢杆菌电转化方案 1 感受态细胞的制备 1.1 从新鲜培养的平板上接种一单菌落至3 ml B2液体培养基中,试管(17×100 mm)。 1.2 250 rpm,37℃培养过夜(16 h)。 1.3 接种1.5 ml过夜培养的种子至150 ml(装于1L的三角瓶中)新鲜的B2培养基中,200 rpm,37℃培养,至菌数达到~1×108 cells/ml。 1.4 将菌液冰水浴15 min,然后转移至250 ml的离心杯中,12
alkaline lysis purification: 7a. Precipitate the DNA by adding 1 ml of 95% ethanol, and resuspend the dried DNA pellet in 100-200 ul 10:0.1 TE buffer. Electrophorese an aliquot of the DNA sample on a 0.7% agarose gel to crudely determine
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