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- 赛默飞（Thermo Fisher）
- 11-4010-80
- 2025年07月01日
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25 UG
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文献和实验。 ④其他试剂和材料 l％叠氮化钠、离心机及离心管、烧杯(25m1)、搅拌器、无菌吸管及毛细滴管、烧杯(500m1)透析袋等。 (2)方法及步骤 ①取高效价的抗人球蛋白兔免疫血清，分离球蛋白，用盐水(0．15mol／LNaCl)及缓冲液(0．5mol／LNaHC03—Na2C03，pH9．0)稀释使每毫升内含蛋白质lOmg，缓冲液为总量的10％，降温至4℃。 ②加入异硫氰酸盐(FITC)荧光素[蛋白：荧光素＝(50—80)mg‘lmg]，在0～4~C下电磁搅拌12～
荧光素FITC标记抗体的方法（Marsshall法、Chadwick法、改良法、透析标记法）
当FITC在碱性溶液中与抗体蛋白反应时，主要是蛋白质上赖氨酸的r氨基与荧光素的硫碳胺键(thiocarbmide)结合，形成FITC-蛋白质结合物，即荧光抗体或荧光结合物。一个IgG分子中有86个赖氨酸残基，一般最多能结合15～20个，一个IgG分子可结合2～8个分子的FITC，其反应式如下 FITC-N=C=S + N-H 2 -蛋白质 → FITC-NS-C-N-H 2 -蛋白质 常用
血清Western Blot去除白蛋白(Albumin)和IgG
，我一般为 5ug/ul. 4. 加入适量 loading buffer ， 100 ℃ 煮 5 分钟。注意：有时会出现水煮后，蛋白液变得非常粘稠，这时可以在 6 5 ℃ 煮 10-20 minutes 以替代沸水煮。 n 对于目标蛋白在血清中含量很低，或者目标蛋白分子量与白蛋白或球蛋白分子量相近的情况下，必烦要去除血清中的白蛋白和 / 或球蛋白，以下是一些知名厂商提供的试剂盒，使用较为简便
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