- ￥3300
- Novus
- 7.8-500
- 2.24 pg/mL
- VAL606
- 2025年07月13日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 灵敏度：
2.24 pg/mL
- 样本：
Cell culture supernatant, serum
- 标记物：
IL-12p70
- 适应物种：
Mo
- 应用：
VAL606
- 检测方法：
小鼠 IL-12 p70 ValukineTM ELISA 试剂盒
- 检测范围：
7.8-500
- 规格：
96t
Mouse IL-12p70 ELISA Kit
17
产品信息及操作手册
小鼠 IL-12 p70 ValukineTM ELISA 试剂盒
目录号：VAL606
适用于定量检测天然和重组小鼠白介素(IL)-12 p70 的浓度
科研专用，不可用于临床诊断
有效期详见试剂盒包装标签
Novus 试剂盒确保在你收货日期 3 个月内有效
I. 背景
白细胞介素12（IL-12，也称NKSF），是70-75kDa的异源二聚体糖蛋白，属于IL-12
异源二聚体细胞因子家族（1-3）。IL-12由35kDa(p35)和40kDa(p40)的两个亚基构成，
这两个亚基由二硫键相连，相互间无氨基酸序列同源性（1, 4, 5）。成熟的p35亚基有
196个氨基酸，包含七个半胱氨酸及一个潜在的N-连接糖基化位点（1-6）。成熟的小鼠
p35与人和大鼠的氨基酸同源性分别为63%和86%。成熟的小鼠p40亚基长313个氨基酸，
包括13个半胱氨酸和5个潜在的N-连接糖基化位点。有研究报道p40序列具有多态性，
但R&D systems的这个IL-12 p70试剂盒不识别这些等位基因产物（9）。成熟的小鼠p40
和人及大鼠的氨基酸同源性分别为72%和93%（1, 7, 10）。虽然p35类似于促红细胞生
成素的配体，但p40更类似促红细胞生成素受体的N-端，有WSXWS结构域、一个免疫
球蛋白样结构域和四个保守的半胱氨酸（1）。这表明IL-12可能是细胞因子受体模拟物，
类似于IL-6可溶性IL-6R复合物（4, 6）。值得注意的是p40可以以单体或同源二聚体形
式存在，而p35却从来没有发现单体形式（3）。p40是白介素23（IL-23）两个亚基中
较大的亚基（3, 11）。虽然IL-12一直被认为是一种分泌型分子，人们在人和小鼠细胞
中也发现了膜结合型IL-12（12）。产生IL-12的细胞包括巨噬细胞、树突状细胞（13）、
单核细胞（14）、朗格汉斯细胞（15）、中性粒细胞(16)、角质形成细胞(17)、类浆树
突状细胞（18）、小胶质细胞（5）、CD8+ DC（仅小鼠细胞）（19）和非生发中心的
（CD38-CD44+） B细胞（仅人体细胞）（3, 20）。
小鼠IL-12的高亲和力受体是由至少2个I型跨膜糖蛋白组成，类似于细胞因子受体
超家族成员。第一个亚基（Rβ1）为100 kDa，以Kd=1nM与IL-12结合（21）。这个受
体是p40亚基的主要结合位点（4, 5）；第二个亚基（Rβ2）为130kDa，与Rβ1亚基无
氨基酸同源性（5, 21, 22）。这个受体是信号转导的重要组成部分，作为一个二硫键相
连的p30-p40二聚体的附着点（4, 5, 22）。如上所述，小鼠p40以单体、二聚体形式存
在，或于p35结合形成IL-12，或于p19结合形成IL-23(3-5, 11)。同源二聚体p40和IL-23
都可以结合IL-12R，作为不传递信号的拮抗剂（3, 23, 24）。或者p40同源二聚体也可
以与Rβ1结合，激活小胶质细胞和巨噬细胞（4, 25）。
从功能上而言，IL-12已被证明能够增强细胞毒性、诱导NK细胞、T细胞和树突状
表皮T细胞产生γ干扰素(3, 26, 27, 28)。有报道表明，IL-12能诱导巨噬细胞产生γ干扰素
(29)。与IL-23和IL-27等其IL-12的家族成员一起，IL-12能促进CD4+ Th1型免疫反应的
进展（4, 5, 30）。作为感染应答，IL-27 zui先分泌，促进TH0向THR0/1过度，随后分泌
IL-12，产生Th1效应细胞。与IL-18、IL-12一起产生把效应细胞转化Th1记忆细胞，接
着这些细胞被IL-23激活（4）。
II. 概述
A. 检测原理
本实验采用双抗体夹心ELISA法。抗小鼠IL-12 p70抗体包被于微孔板上，样品和标
准品中的小鼠IL-12 p70会与固定在板上的抗体结合，游离的成分被洗去；加入辣根过氧
化酶标记的抗小鼠IL-12 p70检测抗体进行孵育。洗涤去除未结合的试剂后，加入TMB
底物溶液（显色剂），溶液颜色与结合的目标蛋白成正比；加入终止液；用酶标仪测定
吸光度。
B. 检测局限
仅供科研使用，不可用于体外诊断；
该试剂盒适用于细胞培养上清样本和小鼠血清样本；
请在试剂盒有效期内使用；
不同试剂盒及不同批号试剂盒的组分不能混用；
样本值若大于标准曲线的最高值，应将样本用稀释液（1×）稀释后重新检测；
检测结果的不同可由多种因素引起，包括实验人员的操作、移液器的使用方式、洗
板技术、反应时间或温度、试剂盒的效期等。
A. 精确度
板内精确度（同一板内不同孔间的精确度）
已知浓度的两个样本，在同一板内分别检测20次，以确定板内精确度。
板间精确度（不同板之间的精确度）
已知浓度的三个样本，在不同板中分别检测20次，以确定板间精确度。
在细胞培养基样本中掺入检测范围内不同水平的小鼠IL-12 p70，测定其回收率。回收率
范围在83.0-107.0%，平均回收率在93.0%。
在小鼠清样本中掺入检测范围内不同水平的小鼠IL-12 p70，测定其回收率。回收率范围
70.5-80.3%，平均回收率在76.2%。
C. 灵敏度
小鼠IL-12 p70的最低可测剂量（MDD）一般小于2.24 pg/mL。
MDD是根据20个重复的零标准品孔的吸光度值的平均值加两倍标准差计算得到的相对
应浓度。
D. 校正
此ELISA试剂盒经R&D Systems®生产的Sf21表达的高纯度重组小鼠IL-12 p70蛋白所
校正。
E. 线性
不同的样本中含有或掺入高浓度的小鼠IL-12 p70，然后用稀释液（1×）将样本稀释到
检测范围内，测定其线性。
此ELISA法可检测天然及重组小鼠IL-12 p70蛋白。将以下因子用稀释液（1×）配制成
50 ng/mL的浓度来检测与小鼠IL-12 p70的交叉反应。将50 ng/mL的干扰因子掺入中间
范围的重组小鼠IL-12 p70对照品中，来检测对小鼠IL-12 p70的干扰。没有观察到明显
的交叉反应或干扰。
重组小鼠蛋白
IL-12p35 IL-12Rβ
IL-12p40 monomer IL-12Rβ2
IL-12p40 dimer
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