Mouse alpha-Fetoprotein/AFP EL

Mouse alpha-Fetoprotein/AFP ELISA Kit，Valukine™

产品信息及操作手册
小鼠 alpha-Fetoprotein/AFP ValukineTM ELISA 试剂盒
目录号：VAL622
适用于定量检测天然和重组小鼠 alpha-Fetoprotein/AFP 的浓度
科研专用，不可用于临床诊断

有效期详见试剂盒包装标签
Novus 试剂盒确保在你收货日期 3 个月内有效

. 背景
α-甲胎蛋白（AFP）是类白蛋白超家族（白蛋白、维生素 D 结合蛋白和 α-白蛋白）
的一员，是一种胎儿和肿瘤相关蛋白，被认为是某些癌症和先天性缺陷的标志物（1-4）。
在人类和啮齿类动物中，它是一种 66-72 kDa 的单链糖蛋白，3-5%的分子量由糖基化
产生（3）。小鼠 AFP 与大鼠、人 AFP 的氨基酸序列同源性分别为 81%和 65%。AFP
在胎儿中主要由肝脏、卵黄囊和胃肠道来源的组织合成（5-8）。在小鼠发育过程中，
AFP 在前肠内胚层中的表达水平较低但可检测到，在形成肝芽的肝母细胞中高度激活，
是肝细胞谱系的最早标记之一（9）。胎儿血清水平在第 10 至 13 周达到峰值，然后在
整个妊娠期下降（10）。相比之下，主要来源于胎儿循环的母体血清 AFP 在妊娠晚期
继续增加，然后下降（10）。
AFP 可以作为载体蛋白，结合多种配体，包括类固醇、胆红素、脂肪酸、维甲酸
和类黄酮（4）。在啮齿类动物中，甲胎蛋白可隔离内源性雌激素，并阻断雌激素受体
（ER）介导的反应的诱导（2）。配体结合可能影响 AFP 三级结构的刚性和构象 （2, 4,
11, 12）。此外，AFP 被认为具有免疫抑制活性，调节细胞增殖和凋亡，启动细胞内信
号传导，并有助于细胞入侵（4, 13）。AFP 的假定细胞表面受体已被描述过，AFP 被
许多细胞类型所内化（14）。AFP 基因敲除小鼠是可以存活的，但雌性小鼠由于激素
环境不足而无法正常排卵（15, 16）。
胎儿和母体AFP水平的改变与一些先天性异常有关，包括甲状腺功能减退、自身免
疫性疾病和心脏缺陷（2, 17-19）。此外，AFP被广泛用作神经管缺陷和染色体异常的
产前筛查标志物（2, 20）。母体血清AFP水平低与唐氏综合征的高发病率相关，而血清
AFP较高水平与脊柱裂和无脑畸形相关（21-24）。出生后产生的AFP与几种病理有关。
AFP是肝细胞癌的常用标志物，AFP水平升高与其他几种癌症相一致，包括肝母细胞瘤、
生殖细胞瘤和某些胃癌（25-31）。

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II. 概述
A. 检测原理
本实验采用双抗体夹心ELISA法。抗小鼠AFP抗体包被于微孔板上，样品和标准品
中的小鼠AFP会与固定在板上的抗体结合，游离的成分被洗去；接着加入生物素化的抗
小鼠AFP检测抗体进行孵育，洗涤去除未结合的物质后，加入链霉亲和素标记的辣根过
氧化物酶（streptavidin-HRP）孵育。洗涤去除未结合的试剂后，加入TMB底物溶液。
溶液颜色与结合的目标蛋白成正比；加入终止液；用酶标仪测定吸光度。
B. 检测局限
 仅供科研使用，不可用于体外诊断；
 该试剂盒适用于细胞培养上清样本和小鼠血清样本；
 请在试剂盒有效期内使用；
 不同试剂盒及不同批号试剂盒的组分不能混用；
 样本值若大于标准曲线的最高值，应将样本用试剂稀释液（1×）稀释后重新检测；
 检测结果的不同可由多种因素引起，包括实验人员的操作、移液器的使用方式、洗
板技术、反应时间或温度、试剂盒的储存等。

B. 回收率
在细胞培养基样本中掺入检测范围内不同水平的小鼠AFP，测定其回收率。回收率范围
在106.9-129.3%，平均回收率在118.3%。
在小鼠血清样本中掺入检测范围内不同水平的小鼠AFP，测定其回收率。回收率范围在
87.0-113.7%，平均回收率在101.3%。
C. 灵敏度
小鼠AFP的最低可测剂量（MDD）一般小于1.23 pg/mL。
MDD是根据20个重复的零标准品孔的吸光度值的平均值加两倍标准差计算得到的相对
应浓度。
D. 校正
此ELISA试剂盒经由R&D Systems生产的NS0表达的高纯度重组小鼠AFP蛋白所校正。
E. 线性
不同的样本中含有或掺入高浓度的小鼠AFP，然后用试剂稀释液（1×）将样本稀释到检
测范围内，测定其线性。

G. 特异性
将以下因子配制成50 ng/mL的浓度来检测没有观察到明显的交叉反应或干扰。
Recombinant mouse Recombinant human
Leptin α-Fetoprotein
Prolactin Natural proteins
Resistin human α-Fetoprotein
Vitamin D BP mouse serum albumin