细菌内毒素检测鲎试剂

细菌内毒素检测鲎试剂分为美洲鲎试剂和东方鲎鲎试剂两大类。一种是由美洲鲎血液提取的称美洲鲎试剂(Limulus Amebocyte Lysate)，缩写为LAL，由美国生产;另一种是由东方鲎血液中提取的称东方鲎鲎试剂(Tachypleus Amebocyte Lysate)，缩写为TAL。鲎试剂是海洋节肢动物鲎血液中的阿米巴细胞( Amebocyte )经裂解液或机械方法裂解细胞后提取得到的一种细胞溶解物。

【鲎试剂原理】

细菌内毒素检测鲎试剂中含有特异性的凝固酶,在一定条件下可被极微量的内毒素激活,当凝固蛋白原的精氨酸¹⁸-苏氨酸¹⁹和精氨酸⁴⁶-甘氨酸⁴⁷之间的肽键被切断后,则游离出含有28个氨基酸的C肽片段和凝固蛋白分子两端的A肽和B肽片段,并通过二硫键联结聚合成凝胶,其形成凝胶的速度和坚固程度与鲎试剂中凝固酶含量及内毒素浓度成正比。根据鲎试剂的这一特殊性质,可以方便、敏感地快速定性或定量检测检品中的内毒素含量。

【鲎试剂分类】

      细菌内毒素检测鲎试剂分类可分为凝胶法、动态比浊法鲎试剂、终点比浊法鲎试剂、动态显色鲎试剂和终点显色鲎试剂。

　　凝胶法系通过鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理来定性分析检测或半定量内毒素的方法。凝胶法是通过学生观察患者有无凝胶形成自己作为一个反应的终点。此法操作系统比较采用简单，经济，不需要专用测定设备，可以有效进行研究定性或半定量测定。

　　动态浊度鲎试剂、末端浊度鲎试剂、动态显色鲎试剂、末端显色鲎试剂是内毒素的定量检测方法。这些定量鲎试剂统称为光度鲎试剂。

　　根据检测原理，末端浊度法和动态浊度法属于浊度法。比浊法测定内毒素含量，方法是检测鲎溶解物试验试剂与内毒素反应过程中的比浊度变化。终点比浊法检测未发现任何商品化产品。动态浊度法是一种测量反应混合物浊度增加或浊度增加速率所需要的反应时间的方法。

　　终点显色法和动态显色法都是一个属于显色基质法。显色基质法系国家利用鲎试剂与内毒素反应研究过程中发展产生的凝固酶使特定底物进行显色释放出的呈色团的多少而测定内毒素含量的方法，根据目标产物通过颜色作为判断内毒素浓度，又称为比色法。显色基质法由于企业不依赖凝固组织蛋白结合形成一种凝胶，抗干扰技术能力强，特别设计适用于生物化学和临床试验样品(黄疸、血液、尿液)的细菌内毒素检测。

　　终点显色法是反应时间较短的马蹄蟹试验法，只需15分钟即可得到结果。此外，它还可进行叠氮化物染色，避免了颜色对马蹄蟹试验的干扰。端点颜色法不需要特殊的检测仪器来准确地量化。

　　美国ACC鲎试剂是目前世界上好的鲎试剂,具有动态浊度法和终点显色法的优点,抗干扰能力强,使用方便,检测范围广,灵敏度高达0.005EU/ml。

【细菌内毒素检测鲎试剂用途】

  细菌内毒素检测鲎试剂主要用来检测革兰氏阴性细菌内毒素(热原)。如用于脑脊液、尿液及血液中内毒素的检测;此外鲎试剂在药品、食品和水质热原检测中也广为应用,特别在家兔热原试验不能检测的检品中,如放射性药品、具有细胞毒性的抗癌药物等;用于基因工程产品的热原检测;是目前最灵敏、简便、可靠、快速而且能够定量的检测内毒素的理想试剂。根据我国卫生部(88)卫药政字第259号通知,目前规定4种大输液(注射用水、氯化钠注射液,5%和10%葡萄糖注射液)必须通过鲎试验检查合格后方可应用于临床。

【注意事项】

  1. 制备鲎试剂检测内毒素所用器皿,如玻璃离心管、针头、吸管、试管等,必须用酸、碱泡过后,250℃2小时或180℃4小时以上干烤,以彻底去除热原;

  2. 所用药品必须用干烤或活性炭吸附法等去除热原,尤其所用水必须经严格去热原并用标准内毒素与鲎试剂检测合格后方可使用;

  3. 加3.1%氯化钠溶液洗涤细胞时,应把玻璃管缓慢摆动或旋转,或用吸管冲洗,使沉淀(细胞)徐徐分散漂起,否则细胞破碎后易凝聚成块;

  4. 裂解时,加裂解液量不能按采血量加入,应按细胞压积计算,因为不同鲎血中所含细胞数量相差悬殊;

  5. 鲎试剂在液态下极不稳定,应该冻干保存并冷藏于-30℃以下避光处。