4-羟基普萘洛尔-O-β-D-葡萄糖苷酸 4-Hydrox

利用植物蛋白质芯片研究蛋白磷酸化

的底物进行筛选。我们通过离体印迹磷酸化作用来确认可能的底物。总的来说，我们的方法能筛选植物蛋白激酶用于进一步的分析，随后的体内实验对评估它们的生理作用是必不可少的 [ 13，24，25 ]。2. 材料 2.1 非变性条件下重组激酶的纯化 ( 1 ) 培养细胞的培养基：含 100 μg/ml 氨苄青霉素，15 μg/ml 卡那霉素，2% 葡萄糖的 2YB 或 LB 培养基。 ( 2 ) 异丙基 β-D-硫代半乳糖苷（IPTG ) 。 ( 3 ) 非变性裂解液：300 mmol

植物蛋白质组学和糖基化

需要 1 mg 蛋白质，较少的蛋白质使用量也适用。 ( 9 ) 用肌醇做内标。 ( 10 ) 由于还原性氨化反应是一种激烈的处理，可能会发生一些蛋白质修饰。为此，有时候最好酶切去除 O-糖苷。 ( 11 ) 总的来说，我们实验室不使用化学处理解离糖蛋白上的N - 糖苷。 ( 12 ) Nonidet  P40 的作用是结合游离的 SDS。 ( 13 ) 需要 60~80 mg 的可溶油菜籽蛋白作为初始材料，制备足够跑一张 2D 凝胶的糖蛋白。 ( 14 ) α

检测鼠肝肌动蛋白(p―acdn)基因

。分离与提纯核酸最基本的要求是保持核酸的完整性及纯度。要从生物组织中提取DNA，睱DNA是以核蛋白(DNP)形式存在于细胞核中故首先必须粉碎组织，裂解细胞膜和核膜，使DNP释放出来，再用苯酚提取蛋白。由于细胞中的核糖核蛋白(RNP)和DNP往往一起被提取，故DNA沉淀中混有RNA。需用核糖核酸酶(RNase)处理，去除RNA。并用蛋白酶将遗留的少量蛋白质水解除去，再经苯酚处理，乙醇沉淀，最后可得较为纯净的DNA。它的纯度可以从260nm波长处的光密度和280nm波长处的光密度之比值测知，一般以O.D