单侧输尿管梗阻小鼠模型构建

一、实验准备

1. 实验动物
   • 通常选用8-12周龄的C57BL/6小鼠（雄性更常用，避免雌性激素对纤维化的影响）。
   • 术前禁食4-6小时（不禁水），减少麻醉风险。
2. 器械与试剂
   • 手术器械：显微镊子、剪刀、持针器、缝合线（5-0或6-0可吸收线）、无菌纱布。
   • 麻醉剂：异氟烷（吸入麻醉）或戊巴bi妥钠（腹腔注射）。
   • 镇痛药：布托啡诺或卡洛芬（术后镇痛）。
   • 消毒用品：碘伏、75%酒精、生理盐水。
   • 其他：加热垫、手术显微镜（可选）。

二、手术步骤

1. 麻醉与固定
   • 小鼠称重后，吸入异氟烷（诱导期3-4%，维持期1.5-2%）或腹腔注射麻醉（如戊巴bi妥钠50 mg/kg）。
   • 俯卧位固定，剃除左侧背部毛发，消毒手术区域。
2. 手术切口
   • 在左侧肋缘下1 cm处做约1-1.5 cm的纵向切口，逐层分离肌肉和腹膜，暴露左侧肾脏及输尿管。
3. 输尿管梗阻
   • 找到左侧输尿管（白色细管状，位于肾盂和膀胱之间）。
   • 完全梗阻法：在输尿管上1/3处用缝合线双重结扎，并剪断中间部分（确保梗阻彻底）。
   • 部分梗阻法（可选）：用细针头扩张输尿管后结扎，保留部分尿流。
4. 关腹与术后护理
   • 逐层缝合肌肉和皮肤，再次消毒切口。
   • 术后放置于37℃加热垫复苏，待完全清醒后放回笼中。
   • 提供镇痛药（如卡洛芬5 mg/kg，连续2-3天）和抗生素（如恩诺沙星）预防感染。

三、模型验证

1. 表型观察
   • 梗阻侧肾脏：术后7-14天可见肾脏肿大（急性期）或萎缩（慢性期），表面苍白或颗粒状。
   • 组织学检查：HE染色（肾小管扩张、炎性浸润）、Masson染色（胶原沉积）、α-SMA免疫组化（肌成纤维细胞活化）。
2. 功能指标
   • 血肌酐、尿素氮（BUN）可能轻度升高（单侧梗阻时对侧肾脏可代偿）。
   • 梗阻侧肾脏重量/体重比增加。

四、注意事项

1. 手术技巧
   • 避免损伤肾动脉或静脉，否则会导致肾脏缺血。
   • 结扎输尿管时勿过度牵拉，防止撕裂。
2. 对照组设计
   • 假手术组：仅暴露输尿管但不结扎。
   • 对侧肾脏作为自身对照。
3. 时间点选择
   • 急性损伤：3-7天（炎症为主）。
   • 纤维化期：7-14天（胶原沉积明显）。
4. 伦理与动物福利
   • 遵循3R原则，尽量减少动物数量，确保镇痛和麻醉规范。

五、常见问题与解决

• 死亡率高：检查麻醉剂量、无菌操作和术后护理。
• 梗阻不完全：确认结扎牢固，必要时剪断输尿管。
• 对侧肾脏代偿：若需排除代偿影响，可缩短实验周期或结合肾切除模型。