- ￥900
- 烜雅生物
- XY-ZL0126
- 国产
- 2026年01月20日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
136
- 英文名：
Escherichia coli DH5α(pLI50-pRPSL-mraY-EGFP)
- 保质期：
２年
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
冻干粉
英文名称：Escherichia coli DH5α(pLI50-pRPSL-mraY-EGFP)
形式：冻干粉
参考用途：质粒用途：蛋白表达
培养基：酵母膏：5.0，蛋白胨：10.0，氯化钠：10.0，琼脂：15.0，pH：7.0±0.2（25℃）
生长条件：37℃；18-24h；好氧
存储条件：2-8℃
安全等级：0
操作步骤：
①准备无菌水1支，90mm抗性平板2块；
②安瓿管表面消毒后在安全柜中打开，用酒精灯灼烧顶部，后迅速滴上无菌水使之破裂，随后用镊子将其敲碎；
③吸取0.5mL无菌水打入冻干管，充分溶解后液涂布抗性平板，200μL/个；
④将抗性平板置于上述指定条件培养18-24h后进行观察（禁止密封缠绕平板）；
⑤挑取单菌落接种到50mL液体LB抗性培养基中，37℃摇床培养过夜；
⑥根据实验需求，吸取适量菌液进行质粒抽提。
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文献和实验平板（25-50mg/ml），37℃培养16-20hr. 7、次日挑取平板上长出的菌落（选择最小的菌落），接种于3ml含25-50mg/ml的LB培养基，37℃培养10-15hr。 8、碱裂法提取质粒，0.8%琼脂糖凝胶电泳筛选，大质粒为可能阳性克隆，进一步酶切鉴定。以PacI单酶切，0.8%琼脂糖凝胶电泳如显示出一条大片段（约30kb），及一条小片段（约3.0或4.5kb）（同时可进行其它酶切鉴定），则基本确定为阳性克隆。 9、取1-5ul 阳性质粒转化至DH5α大肠杆菌细胞（BJ5183
最小的菌落）,接种于3ml含25-50mg/ml的LB培养基，37℃培养10-15hr。 8 碱裂法提取质粒，0.8%琼脂糖凝胶电泳筛选，大质粒为可能阳性克隆，进一步酶切鉴定。以PacI单酶切，0.8%琼脂糖凝胶电泳如显示出一条大片段（约30kb）,及一条小片段（约3.0或4.5kb）（同时可进行其它酶切鉴定），则基本确定为阳性克隆。 9 取1-5µl 阳性质粒转化至DH5α大肠杆菌细胞（BJ5183为recA+,质粒DNA易发生突变，DH5α或JM109，XL1-blue菌株
体总数＝菌落数×（转化反应原液总体积/涂板菌液体积）插入频率＝蓝色菌落数/白色菌落数转化频率＝转化体总数/加入质粒DNA的量（计算出每微克的转化菌落数）4．操作步骤 1）大肠杆菌感受态细胞的制备(CaCl2法) (1) 从新活化的E.coli DH5α菌平板上挑取一单菌落，接种于3～5ml LB液体培养中，37℃振荡培养12h左右，直至对数生长期。将该菌悬液以1:100～1:50转接于100ml LB液体培养基中，37℃振荡扩大培养，当培养液开始出现混浊后，每隔20～30min测
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